Татьяна омельченко: фильмография, фото, биография. , Переводчик.

Автор: | 06.11.2019

Содержание

Татьяна Омельченко ВКонтакте, Санкт-Петербург, Россия, id1276893

Art and Soul
"Если природа — это материя, стремящаяся стать душой, то искусство — это душа, выражающая себя в материальном." Оскар Уайльд (английский писатель)

Интересные события в Санкт-Петербурге
Fiesta.Ru — для людей, интересующихся событиями Петербурга и всем, что связано с городом. Мы ищем необычные, интересные мероприятия, делимся фотографиями и рассказываем о неформальных достопримечательностях города.

Такие дела
Медиа про Россию и людей, о которых нельзя молчать

Палата №6
Рекомендовано для 18+ Привет, друг мой. Если ты здесь, значит тебе есть что рассказать о своей жизни. Давай познакомимся ближе с Палатой №6 😏 Палата - это самое крупное сообщество рунета с анонимными историями. Мы публикуем только реальные откровения, которые присылают наши читатели. Читая стену Палаты, ты окунёшься в жизнь со всеми её положительными и отрицательными моментами через истории, которые мы тщательно отбираем для тебя среди десятков тысяч ежедневно предложенных 😎 Каждый из нас ежеминутно испытывает целую палитру эмоций: радость, грусть, сочувствие, любовь, горе, страх, безразличие, удовольствие, месть и другие. И каждую из них ты можешь испытать, читая стену Палаты №6. Поэтому состояние истерического смеха или дикого шока после прочитанного - это норма для наших читателей 😌 А также, с помощью системы хэштегов ты всегда сможешь почитать истории на любую тему. Пользуйся, это удобно. Ниже список самых популярных хэштегов: #Еженедельный_топ@pn6 #другаясторона@pn6 #Поговорили@pn6 #Тест@pn6 #Опрос@pn6 #Транспорт@pn6 #Добро@pn6 #Старички@pn6 #Зверопост@pn6 #Мистика@pn6 #Жиза@pn6 #Успех@pn6 #Любовь@pn6 #Семья@pn6 #Работа@pn6 #Фейл@pn6 #Дети@pn6 #Женщины@pn6 #Мужики@pn6 #Экспонат@pn6 #Отношения@pn6 #Девяностые@pn6 #Странности@pn6 #Счастье@pn6 #Месть@pn6 #Обида@pn6 #Пошлое@pn6 #Соседи@pn6 #Универ@pn6 #Шооок@pn6 #Милости@pn6 #Бесит@pn6 #Батя@pn6 #Мама@pn6 #Пздц@pn6 #Судьба@pn6 #Мотивация@pn6 #Удивительное@pn6 #Друзья@pn6 #Грустно@pn6 Помимо откровений, мы окунем тебя в мир знакомств среди миллионов добрых и отзывчивых людей.

Уютную атмосферу, десятки флешмобов, конкурсов с ценными призами и, конечно же, массу положительных эмоций! Мы можем еще долго говорить о вселенной Палаты №6, но быстрее и лучше ты сможешь узнать её, когда подпишешься на наше сообщество и начнешь читать каждый день. Это затягивает, дружище, будь осторожен 😈 Если ты прочитал этот текст, значит ты уже с нами и мы можем вернуться к твоей крутой жизненной истории, которой ты хотел поделиться с почти 8 миллионами таких же, как и ты! Прислать её ты можешь в "Предложить новость". Твоя история будет абсолютно анонимной, не волнуйся 😉 Политика Конфиденциальности сообщества: vk.com/topic-56106344_31728643 Написал откровение? Поздравляю, теперь ты часть безграничной семьи Палаты №6, и это навсегда. Пугает? Вызывает гордость? Любопытство? Сердце колотится и трясутся руки? Это далеко не все эмоции, которые ты испытаешь здесь, когда твой секрет опубликуют в первый раз. Удачи тебе, мой друг 😎

Есть ли жизнь в деревне? Семья Овечкиных.


Добро пожаловать, друзья ! Мы семья Овечкиных - Евгений, Влада и наши детишки. В этой группе мы хотим делиться с вами впечатлениями, фотографиями, идеями и опытом жизни на своей земле. Если вам это интересно - welcome! И, конечно же, давайте здесь быть вежливыми и доброжелательными. Также приглашаем в наш Инстаграм ovechkin_family И на наш канал на ютубе https://m.youtube.com/channel/UC9kknLFxPeCfxLyCDzmI6Hw/videos?shelf_id=1&sort=dd&view=0

Идеи Handmade
Сообщество для тех, кто любит творить своими руками!

Покровская богадельня в Сергиево
Наш Дом престарелых- это Дом милосердия при храме прмч.

Андрея Критского - "Покровская богадельня", единственная в Санкт-Петербурге, находящаяся в одном здании с храмом, в этом - уникальность богадельни. Впервые, в этом здании, богадельня была открыта в 1903 году и просуществовала до 1918 года. Повторное открытие состоялось в феврале 1996 года и на протяжении почти 25 лет наши двери открыты для тех, кто нуждается в особом уходе и любви.

Типография Зеленый коридор Спб
Сервис АВТОМАТИЧЕСКОЙ ПЕЧАТИ готовых макетов. Менеджеров нет. Дизайнеров нет. Печатников нет. Все автоматизировано, поэтому дешево. Печатаем визитки, буклеты, брошюры, папки, квартальные календари, конверты ОНЛАЙН с доставкой по Санкт-Петербургу E-mail: [email protected]

Черниговская Татьяна Владимировна
Официальная страница Черниговской Татьяны Владимировны- российского ученого в области нейронауки и психолингвистики.

Сундучок Историй ☆Сказки на ночь, Аудиосказки☆
Сундучок Историй - это проект Татьяны Неделькиной, созданный в помощь родителям. Здесь вы найдете настоящие СКАЗКИ НА НОЧЬ для лёгкого засыпания. *️⃣За последние 3 года Татьяна озвучила около 300 книг. *️⃣ Прочитала больше 2000 книг, чтобы отобрать самые лучшие для Сундучка Историй *️⃣Разработала собственную методику создания особенных сказок, от которых даже самый энергичный ребенок успокоится и уснёт здоровым сном. Сказки на ночь от Сундучка Историй это: • Аудиосказки (детские аудиокниги) • Видеосказки: у любой аудио сказки есть видеоверсия в картинках. 💖Только Добро и Любовь в каждой истории! ✔Все сказки прошли тщательный отбор, чтобы попасть в Сундучок Историй.

Аудиосказки озвучены Татьяной Неделькиной эксклюзивно для Сундучка Историй. ❗Любое использование разрешено только с указанием ссылки на источник или по согласованию с диктором. ____________________ 👉Для связи с автором проекта и чтецом (Татьяна Неделькина) пишите на [email protected] или администратору группы, указанному в контактах. __________________ Нравится проект? Поддержите его на любую сумму удобным вам способом : 💲paypal.me/sunduchokistorii 💲Или WebMoney WMR: R626883453074 WMZ: Z507784694133 💲Яндекс-деньги 410015973794005

Зайка Развивайка
Занятия, игры, поделки, прописи, уроки и советы для раннего развития детей

Just Cook
Для людей, которые любят кушать много и вкусно. Рецепты, кулинарные лайфхаки, шедевры знаменитых поваров. И всё это с дополнительной заправкой юмора.

ОМФест // Ораниенбаумский морской фестиваль
Что такое ОМФест? Это шоу парусных кораблей на Сидоровском канале, выставки судомоделистов, яркое и шумное шоу морских каскадёров «Абордаж», тест-драйвы катеров и лодок, конкурс полного морского образа "Orange sea full fashion look", дог-шоу “Солёный пёс”, летние кафе и аттракционы и многое другое! _________________________________ Ежегодно в последние выходные августа в акватории Финского залива в окрестностях г. Ломоносов на набережной Сидоровского канала, проходит традиционный международный «Ораниенбаумский морской фестиваль» (ОМФ) В 2017 и 2018 году морской фестиваль завоевал гран-при всероссийского конкурса «Russian Event Awards» в номинации «Лучшее туристическое событие страны в области спорта» и вошёл в национальный календарь событий! СПОРТ НА ОМФ – представлена крупнейшей регатой Северо-Западного региона России - «Orange race» среди парусных яхт и катамаранов на приз Светлейшего князя Александра Даниловича Меншикова.

Соревнования собирают до сотни экипажей яхтсменов, проходит детская межклубная гонка на швертботах, показательные выступлениями SUP-серфингистов. ТВОРЧЕСТВО НА ОМФ – это дневная концертная программа «Акватория искусств» в режиме нон-стоп и в стиле фьюжн, объединяющая исполнителей всевозможных жанров: рок, джаз, поп и народное творчество. Стало традицией встречать в Сидоровском канале и большие парусники «Надежда», "Красотка", "Триумф", Грумант, Лукулл. Проводится на ОМФесте и Фантазийный конкурс «ORANGE SEA FULL FASHION LOOK»(полный модный образ). Инициаторами мероприятия стало творческое объединение визажистов Санкт-Петербурга и Петродворца. В нем примут участие команды, состоящие из профессионалов индустрии моды: стилистов, визажистов, парикмахеров, модельеров, моделей. Это уже не первый опыт организаторов по совмещению спортивного направления с модными показами. Бывали на омфест показы спортивной яхтенной одежды от Bergans и коллекции от дизайнеров Санкт-Петербурга. ДЕЛО НА ОМФ.
В рамках работы фестиваля состоится традиционный международный деловой семинар. _______________________ Для желающих продлить свой отпуск и подольше пообщаться с яхтсменами предоставляется возможность поселиться в палаточном городке спортсменов, приняв участие в проекте “Ночёвка”. Цели Фестиваля: ● развитие яхтенного и водно-моторного спорта в Санкт-Петербурге ● пропаганда активного и здорового образа жизни среди горожан ● развитие южного побережья Финского залива как рекреационной зоны Санкт-Петербурга ● развитие туристического потенциала г. Ломоносов и Санкт-Петербурга в целом ● привлечение внимания к экологическим проблемам региона ● позиционирование города Ломоносов (Ораниенбаум), как приморского города Подробности проекта на сайте www.omfestival.ru/ Группа ОМФ – vk.com/omfestival

То, что вдохновляет…
Это паблик о человеческой доброте и мотивирующих поступках, о сильных духом людях, о семейных ценностях и обо всём, что вдохновляет!

Vandrouki | Путешествия почти бесплатно (RU)
Мы ищем самые выгодные перелеты по Европе и всему миру, а вам остается только летать! Мы не агентство и не турфирма. Мы — блог о бюджетных путешествиях, который просто делится найденными акциями и скидками: нам не жалко 🙂

Отдам даром СПБ - юг
Санкт-Петербургское сообщество людей, у которых есть ненужные вещи, которые они готовы отдать абсолютно бесплатно. Отдам даром СЕВЕР - https://vk.com/otdamdaromspb_sever Животных не публикуем Вкусности к чаю, угощения для ребёнка и т.д. просить категорически запрещено. Используйте кнопку "предложить новость"!

Азербайджанская спортсменка Татьяна Омельченко вышла в 1/4 финала чемпионата мира по борьбе - АЗЕРТАДЖ

Баку, 18 сентября, АЗЕРТАДЖ

В Нур-Султане продолжается чемпионат мира по борьбе

Как сообщает АЗЕРТАДЖ, в пятый день чемпионата – 18 сентября проходят соревнования среди женщин-борцов в весовых категориях 57, 59, 65 и 76 кг.

Наша спортсменка Алена Колесник (57 кг) уверенно начала борьбу. Успешно выступив во второй части схватки, она одержала победу приемом туше над представительницей Украины Ириной Чихрадзе. Но в следующем этапе А.Колесник не сумела одолеть спортсменку из Корейской Народно-Демократической Республики Ин Сун Йонг.

Первая встреча другой нашей представительницы Татьяны Омельченко (59 кг) продлилась всего 1 минуту 57 секунд. За это время член нашей сборной, применив прием туше, победила соперницу из Новой Зеландии Ану Паулину Мокеава. Превзойдя представительницу Вьетнама Ти Хуонг Дао, Т.Омельченко вышла в 1/4 финала.

Сабира Алиева (76 кг) в первом туре одержала победу в трудной схватке со спортсменкой из Республики Корея Энью Хванг. Но в 1/8 финала наша соотечественница уступила немке Алине Роттер Фоккер.

Во второй день соревнований из наших борцов греко-римского стиля Рафиг Гусейнов (82 кг) выиграл серебро, а Эльданиз Азизли (55 кг) – бронзу.

Прошедшая в финал чемпионата мира азербайджанская спортсменка Мария Стадник (50 кг) сегодня выступит в финале. Ее соперницей будет румынка Эмилия Алина Вук.

Отметим, что на чемпионате мира за 30 комплектов медалей соревнуются 900 борцов из свыше 100 стран мира. На чемпионате, носящем лицензионный характер на летние Олимпийские игры «Токио 2020», спортсмены ведут борьбу за 108 олимпийских лицензий.

AZERTAG.AZ :Азербайджанская спортсменка Татьяна Омельченко вышла в 1/4 финала чемпионата мира по борьбе

© При использовании информации гиперссылка обязательна.

При обнаружении в тексте ошибки, надо ее выделить, нажав на клавиши ctrl + enter, и отправить нам

«После Рио мест в спортшколе не хватает»

Президент Федерации фехтования Красноярского края Татьяна Омельченко воочию наблюдала блестящие победы российских спортсменов на Олимпиаде в Рио-де-Жанейро. Вместе с другими россиянами она отчаянно старалась перекричать весь зал во время боёв наших ребят и девушек. И голосовые связки были сорваны недаром. Российская сборная выступила блистательно. Мы встретились с Татьяной Анатольевной, чтобы вместе вспомнить и обсудить те прекрасные мгновения. Но разговор пришлось начать не с этого. Впервые довелось побывать в спортзале, где тренируются красноярские фехтовальщики. Старое здание в ближайшем будущем планируется отдать под снос.

— Где планируете базироваться в будущем?

— Думаю, что найдём, где заниматься. Власти краевые и городские не оставят нас без места. К сожалению, новых объектов именно для фехтования никто уже давно не возводит ни в городе, ни в крае. К Универсиаде, конечно, многое построят. Но ориентация будет на зимние виды спорта. Хотя, возможно, и нам станет легче. Фехтование — олимпийский вид спорта. Однако если говорить начистоту, то до Олимпиады в Рио мы особой популярностью не пользовались. У нас происходит большой отсев детей, так как фехтование сложно-координационный вид спорта. А из-за того, что большой приток желающих заниматься фехтованием не наблюдался, был набор, а не отбор. Но после Олимпийских игр начался такой вал обращений, что мы не успеваем отвечать на звонки.

— Родители посмотрели Олимпиаду и захотели, чтобы их дети занялись фехтованием и стали чемпионами?

— Медалей на Играх было много, по ТВ часто велись трансляции олимпийских состязаний. Даже те, кто раньше не видел фехтование и не знал, что это такое, полюбили и заболели этим видом спорта. Но принять всех желающих невозможно. Ресурсов, как кадровых, так и финансовых, катастрофически не хватает. С помещениями проблема, находимся в подвешенном состоянии. С родителей мы денег за тренировки не берём, нам за это зарплату платят.

— А в каком возрасте обычно приводят детей в фехтование?

— Набор идёт с восьми-девяти лет. На первых этапах мы с ними бегаем, прыгаем, играем, занимаемся общим развитием. Приходят и дети от 10 до 14 лет и даже старше. У кого есть данные, те начинают фехтовать.

— Оружие когда выдают?

— Сразу же. Пришли и сразу дали в руки шпагу.

— Вы серьёзно или шутите?

— Серьёзно. Раньше дети могли месяц работать без оружия, отрабатывать приёмы и передвижение в боевой стойке. Сейчас же, если на второй тренировке не дать шпагу, они больше не придут, вернутся в Интернет разглядывать картинки и так далее. Поэтому мы стараемся как можно скорее заинтересовать ребёнка. На первом занятии идёт организационная работа, ОФП, смотрим на ребят, а уже на второй-третьей тренировке даём оружие.

— Сколько сейчас детей от 12 до 16 лет занимаются фехтованием?

— Около ста человек.

— Среди них есть одарённые ребята?

— Конечно.

— А каковы успехи красноярских фехтовальщиков?

— Успехи в основном на уровне Сибирского федерального округа. Кадеты есть хорошие, мальчики и девочки. Но, как показывает практика всероссийских соревнований, даже наши перспективные спортсмены при таком уровне конкуренции остаются в серединке.

— Почему?

— Нам не хватает соревнований, сборов, выездов. Поездок по Сибири недостаточно. А чтобы поехать в условный Киров, нужны дополнительные деньги, взять их негде. Один турнир спонсирует школа, ещё два или три соревнования — министерство спорта края. Получается три или четыре выезда в год — это катастрофически мало.

— Неудивительно, что талантливые ребята уезжают.

— Да, мы лишились двух достойных спортсменов. Одна девочка уехала в Москву. Выступала на кадетских чемпионатах мира и Европы. Парень из Норильска переехал в Уфу. Он участник первенства мира и Европы.

— Давайте о более приятном. Вы были в Рио и воочию видели победы российских спортсменов. Как удалось попасть на Олимпиаду?

— На такие соревнования довелось поехать первый раз в жизни. Федерация фехтования России выделила квоты. Практически все президенты региональных федераций нашего вида спорта поехали на Игры. А по прибытии мы почти все дни провели в спортзале, Рио-де-Жанейро толком посмотреть не удалось, но в океане покупаться успели. Всего нас было около 130 человек.

— А ещё болельщики из России в зале были?

— Не видела, но, скорее всего, были.

— То есть это только Вы так хорошо кричали и болели?

— Да уж, связок не жалели. Ехали с очень оптимистичными ожиданиями. План был — три золотые медали. Наши спортсмены его даже перевыполнили.

— Оптимистичный план, учитывая, что на прошлых Играх не было ни одного первого места.

— План выполнимый. Четыре года до Олимпиады велась огромная работа, и она принесла свои плоды. Сильная женская сабля, рапира женская на высоком уровне. Девочки-шпажистки очень порадовали, и сильно впечатлили мужчины-рапиристы.

— До Игр на слуху было разве что имя Софьи Великой, теперь же наших чемпионов знает в лицо огромное количество людей.

— Софью Великую знали все. Но и кроме неё было достаточно много прекрасных спортсменов. Те же Инна Дериглазова и Аида Шанаева.

Уже сейчас даже в нашем городе настоящий бум фехтования. То же самое происходит по всей стране. Фехтование — прекрасный вид спорта. И мужественный, и женственный одновременно.:

— Я особо никогда не причислял себя к любителям фехтования, раньше во время Игр за новостями в основном следил: выиграли или проиграли. Но в этот раз смотрел все трансляции, и было реально интересно.

— Много показывали — красиво, интересно. Классные и квалифицированные комментаторы. Всё это способствовало повышению популярности фехтования в нашей стране, но главную роль, конечно, сыграли победы россиян.

— Много было спорных моментов. Даже на видеоповторах показывали, что удар нанёс первым один спортсмен, а балл отдавали другому, есть какие-то нюансы?

— Конечно. В рапире приоритет отдают действию. Если сделана защита-ответ, очко присуждают тебе. А в сабле наоборот, приоритет в атаке, кто раньше начал атаку, тот и победил. Я сама шпажистка, в рапире и сабле всех нюансов до конца не понимаю, но судьям виднее.

— В российском финале Великая — Егорян за кого болели?

— За Яну Егорян.

— Почему?

— Молодая, более эмоциональная, яркая. По её фехтованию было видно, что именно она выиграет Олимпиаду.

— Не соглашусь. До поры до времени Великая смотрелась в финале более солидно.

— Софья даже слишком солидно смотрелась. Фехтовала с какой-то опаской. А Егорян просто горела. Всё делала чётко и правильно, при этом очень красиво. Считаю, что её победа абсолютно справедлива. Олимпиада, на мой взгляд, для молодых.

— А как же победы Станислава Позднякова, Павла Колобкова в приличном для спортсмена возрасте?

— Это редкие исключения. В шпаге у опытных спортсменов есть небольшое преимущество, но в рапире и сабле на коне молодые в основном.

— Но ведь и Великая тоже далеко не возрастная. Я лично болел за неё. И хоть выиграла в итоге россиянка, всё равно был расстроен.

— Егорян была по-спортивному наглее, увереннее, быстрее. На дорожке нет подруг и авторитетов. Два противника лицом к лицу. Никаких указаний от тренеров в принципе быть не могло. Девушки решили, кто из них действительно сильнее. Великая всё-таки выиграла серебро, а знаменитая американка Мариэль Загунис и вовсе не добралась до подиума. Её выиграла наша Екатерина Дьяченко в 1/8 финала.

— А в Вашей группе болельщиков как симпатии разделились?

— Абсолютное большинство болело за Великую.

— То есть Вы были в коалиции?

— Да, но было видно, что Софья слишком осторожна и аккуратна, так золото не выигрывают.

— После такого личного финала не было сомнений в командном золоте саблисток?

— Насчёт медали не сомневались, о золоте боялись загадывать. Но наши девочки — большие молодцы. И Юлия Гаврилова (запасной спортсмен) прекрасно себя показала. Соперниц просто не замечали, Украину ту же — пожалуй, самого серьёзного соперника — разнесли в пух и прах, украинок даже было жаль после боёв.

— Самым эмоциональным моментом фехтовального турнира, да и, наверное, одним из самых ярких событий Олимпиады стала героическая победа мужской сборной рапиристов, безнадёжно проигрывающих в финале. Но затем совершивших настоящий спортивный подвиг. Как в зале реагировали на то, что творили наши ребята?

— Это было вообще неописуемо. Мы сидели, смотрели, видели, что шансов особо нет. Когда перед последним кругом мы проигрывали девять уколов, начались разговоры, что серебро — это хорошо. Но вышел один, отыграл много, затем второй вывел вперёд, и соперник поплыл.

— А что произошло с французами? Они фавориты. Выглядели намного сильнее, но затем просто встали.

— Так бывает. Всё получается, доходишь до десятого укола и впадаешь в ступор. Хочется выиграть быстрее. Торопишься, раз не попал, в ответ пропустил, второй раз не попал... А соперник уже на кураже, ему и так терять нечего, а теперь он и вовсе выглядит неуязвимым, а ты ничего уже не можешь сделать — и проигрываешь.

— Я так понимаю, что для фехтовальщиков и многих представителей других видов спорта Олимпиада — это единственный шанс стать обеспеченными людьми.

— Не совсем. Сборники получают достойно.

— Зарплаты членов сборной страны по фехтованию можно сравнить с окладами клуба ФНЛ, к примеру?

— Ну что вы сравниваете. До футболистов им как до луны. Можно много аналогий приводить. Футболисты второго по силе дивизиона тратят на один выезд больше денег, чем нам выделяют финансирование на год в крае. Попав в сборную, спортсмены зубами вгрызаются в свой шанс, не желая никому отдавать своё место. Та же Татьяна Логунова — двукратная олимпийская чемпионка, я сама с ней ещё фехтовала, была в Рио и выиграла бронзу в команде. Любовь Шутова из Новосибирска также входила в состав бронзовой команды шпажисток в Рио.

— Вы сами фехтовали на достаточно серьёзном уровне.

— Дофехтовалась до звания мастера спорта. Была третьей на первенстве России, шестое место на чемпионате страны занимала. Показывала стабильные результаты, но слишком рано пришлось завершить спортивную карьеру, в первую очередь из-за нехватки средств. Я в 1996 году переехала сюда из Бишкека и выступала с тех пор только за Красноярск.

— В Москву не звали?

— Звали, но в те времена не принято было переходить от тренера к тренеру. Это считалось некрасиво и не приветствовалось.

— Как думаете, после Рио фехтование станет одним из самых популярных видов спорта в России?

— Если будет такое же освещение в СМИ, столько же внимания будут уделять спортсменам, безусловно, станет. Уже сейчас даже в нашем городе настоящий бум фехтования. То же самое происходит по всей стране. Фехтование — прекрасный вид спорта. И мужественный, и женственный одновременно.

Рагимзаде завоевал золотую медаль киевского турнира

Рагимзаде завоевал золотую медаль киевского турнира

28 февраля 2021 00:16

В Киеве (Украина) продолжается традиционный международный турнир по борьбе, где выступают и азербайджанские спортсмены.

Как сообщает azerisport.com, во второй день турнира на ковер вышли еще 8 представителей сборной Азербайджана по вольной и женской борьбе. Из них двое сумели выйти в финал.

61 кг. Ахмеднаби Гварзатилов выиграл в 1/8 финала у Ричарда Вильгельма (Венгрия) - 4:1. В 1/4 финала он победил Камиля Керимова (Украина) - 11:0. В полуфинале он одолел Икромжона Гаджимурадова (Кыргызстан) - 7:4, и вышел в финал.

70 кг. Джабраил Гаджиев в 1/8 финала одолел Георге Робу (Молдова) - 6:2. В четвертьфинале он взял верх над Иваном Кусяком (Украина) - 4:3. В полуфинале он оказался сильнее Исламбека Орожебкова (Кыргызстан) - 5:3, и вышел в финал.

79 кг. Рашад Юсифли в квалификации победил Абдуллу Арслана (Турция) - 7:1. В следующей схватке он уступил Арману Авакяну (Армения) - 5:10, и завершил выступление.

92 кг. Осман Нурмагомедов проиграл в квалификации Омаргаджи Магомедову (Беларусь) - 3:3, и завершил выступление.

125 кг. Вахид Галаеев в 1/8 финала победил Анзора Болтукаева (Россия) - 3:1. В четвертьфинале он уступил Камилу Качиолеку (Польша) - 2:13. Поляк в дальнейшем пробился в финал, благодаря чему у Галаеева появился шанс завоевать бронзу через утешительные схватки.

53 кг. Лейла Гурбанова проиграла в 1/8 финала Юлии Леордре (Молдова) - 0:6. Татьяна Воронцова уступила на старте Наталье Кливчуцке (Украина) - 2:12. Обе завершили выступление на турнире.

62 кг. Татьяна Омельченко уверенно начала турнир, одолев на старте Катаржину Мадровску (Польша) - 7:2, но в 1/8 финала проиграла Юлии Ткач (Украина) - 3:13, и завершила выступление.

Помимо этого, еще пятеро борцов сборной Азербайджана боролись за медали. Из них один взял золото, а двое завоевали бронзу. 

65 кг. Финал. Али Рагимзаде в решающей схватке одолел Эмазара Ахматалиева (Кыргызстан) - 5:4.

Туран Байрамов в схватке за бронзу одолел Эрика Арушаняна (Украина) - 3:0, и завоевал медаль.

50 кг. Тюркан Насирова во встрече за бронзу взяла верху над Мариной Драгутан (Молдова) - 12:4, и завоевала медаль.

68 кг. Ирина Нетреба в схватке за бронзу уступила Дануте Домикайтите (Литва) - 1:12.

74 кг. Ашраф Аширов начал путь к бронзе с первой утешительной схватки, в которой одолел Исхака Бухорса (Алжир) - 12:2. В следующей схватке уступил Касуму Касумову (Украина) - 3:6, и завершил выступление.

Под знаком перемен. Чем запомнится воронежцам неделя с 21 по 26 февраля?

В Воронежской области завершающаяся неделя оказалась полна событий, которые объединял общий фактор – перемены. В одних отраслях они произошли – причем во многом довольно неожиданные, в других – напротив, от вполне ожидаемых новаций отказались. А позитивными станут эти решения или нет – со временем оценят жители. Подборка самых интересных событий – в материале корреспондента «Обозреватель.Врн».

Так, в Воронеже власти после проведенного в соцсети опроса отказались от инициативы по установке медиафасада на здании кинотеатра «Пролетарий». Оказалось, что большинству жителей областного центра идея обновить главную историческую улицу города таким образом не пришлась по душе – так что инвестор, ранее получивший согласие владельца кинотеатра, может искать для своего проекта другой объект. Не будет у нас своей Пятой авеню – как минимум, в ближайшей перспективе.

С другой стороны, получила неожиданное продолжение скандальная ситуация, связанная со сносом исторического комплекса хлебозавода в центре Воронежа. Согласно проведенной экспертизе – к которой у многих общественников и экспертов, кстати, возникли вопросы – оказалось, что объект исторической или культурной ценности не представляет. Все просто – он снесен! Нет здания – нет ценности, логика, с которой спорить бесполезно.

Другой резонансный спор – между музеем «Дивногорье» и РПЦ – неожиданно завершился в пользу учреждения. Епархия так и не получила контроль над пещерным храмом иконы Сицилийской Божьей Матери, расположенным на территории Дивногорья – комплекс оставили в управлении музея. Правда, согласна ли РПЦ с подобным решением или будет дальше его оспаривать – еще неизвестно.

Отдельно стоит сказать о ситуации с распространением коронавируса в области. Судя по официальной статистике и заверениям властей, динамика положительная: в сутки инфекцию обнаруживают у все меньшего количества пациентов, свободных коек в больницах становится все больше. По этой причине власти пошли на логичное решение – смягчение ковидных ограничений, которое сильно разнообразит досуг болельщиков и театралов. Теперь зрители смогут попасть на детские спектакли и концерты, а взрослые – посетить спортивные матчи. Правда, в обоих случаях заполняемость залов и трибун не должна превышать 50% мест.

Впрочем, не обошлась неделя и без печальных новостей. В Воронеже скончались сразу двое известных горожан – многолетний директор МУП «Воронежгорэлектротранс» и депутат Воронежской городской Думы Олег Плаксин, а также писатель-афорист Аркадий Давидович.

В политической жизни региона уходящая неделя запомнилась изменениями в руководстве реготделений двух партий. И если смену главы воронежского представительства ЛДПР заметили, пожалуй, лишь интересующиеся наблюдатели и политологи – слишком часто один последователь Владимира Жириновского меняет другого – то обновление в обкоме КПРФ действительно заслуживает упоминания. Вице-спикер облдумы Сергей Рудаков, бессменно руководивший местными коммунистами около 13 лет, уступил лидерство в партии – и пост первого секретаря в реготделении КПРФ – Андрею Рогатневу. Правда, на «революцию» подобный шаг все же претендовать вряд ли может: известный своим ораторским талантом политик больше 10 лет играет важную роль в обкоме, так что новичком его назвать не получится. Однако тренд на обновление – пусть и не кардинальное – есть.

И в завершении нельзя обойти вниманием громкие криминальные и судебные события в регионе. Так, в пятницу, 26 февраля, стало известно о задержании сотрудниками ФСБ 15 инспекторов ДПС в Павловском районе. Суть претензий силовиков к представителям ГИБДД пока не известна – в обоих ведомствах инцидент до сих пор не прокомментировали. Зато другое резонансное дело – в отношении бывшего ректора воронежского опорного вуза Сергея Колодяжного – похоже, стремится к завершению. Еще в начале недели экс-главе ВГТУ продлили срок содержания в СИЗО до 3 марта – эта дата должна была стать окончательной, потому что подозреваемый провел бы в изоляторе максимально предусмотренный законом срок – год. Однако 26 февраля Сергея Колодяжного отпустили под домашний арест до 28 мая, при этом для бывшего ректора смягчили статью – ему инкриминируют растрату, а обвинения во взятках и крупном мошенничестве с экс-главы вуза сняли. Чем вызвана подобная лояльность следователей – возможно, узнаем в ближайшем будущем, при передаче дела в суд. Или при громком задержании очередного политика или чиновника.

Татьяна Омельченко

Медицинский центр «Медэлит» - предоставление медицинских услуг в городе Гродно

Наши преимущества

1. Ваше здоровье в руках профессионалов

В медицинский центр «Медэлит» приходят люди с разными проблемами и каждому, врачи оказывают персональный прием. Главная цель сотрудников клиники — вылечить пациента, а не увеличить количество посещения. Мы гордимся нашими результатами и высоким уровнем обслуживания!

2. Проверенные методики

Мы используем в работе самые передовые и действенные методики, прошедшие многолетние испытания, а также последние достижения мировой медицины. Применяемые нами методы доказали свою эффективность и безопасность.

3. Наш медицинский центр использует самые прогрессивные технологии

Для точности диагностики и эффективности лечения мы применяем высокотехнологичное оборудование. Благодаря этому вы получите быстрые и достоверные результаты. Клиника оснащена единой информационной медицинской системой. Нашим пациентам предлагаются самые современные решения.

4. Мы проводим высококачественное обслуживание

Пациенты получают первоклассную диагностику, посещают профессиональных докторов и проходят лечение современными методиками. Мы знаем, насколько важен для вас индивидуальный подход, проявление доброты и уважения. Именно поэтому, сконцентрировались на качестве от первого звонка до очередного визита пациента в медицинский центр.

5. Мы продумали специальные предложения и акции

Организация ежемесячных акций и специальных предложений позволяет нам проявлять свою лояльность и внимательность к пациентам. Мы предлагаем гибкую систему скидок для постоянных клиентов, инвалидов, пенсионеров, проживающих рядом с медицинским центром и для подписчиков в социальных сетях.

6. Наша ответственность
  • Перед пациентами за результат лечения. Мы гарантируем применение эффективных, современных и безопасных методов диагностики, лечения и профилактики, соблюдение высоких морально-этических норм и конфиденциальность лечебного процесса.
  • Перед сотрудниками за обеспечение достойных и безопасных условий работы, справедливой заработной платы и возможности для профессионального роста.
  • Перед обществом за строгое соблюдение законодательства Республики Беларусь, за информационную и экономическую прозрачность деятельности.
  • Перед государством за внесение своего вклада в оздоровление населения, улучшение качества и продолжительности жизни граждан.

В Госдуме считают, что криптовалюты нужно легализовать

Отечественные законодатели считают неизбежным легализацию сделок с криптовалютами из-за выбранного пути по налогообложению рынка

Налогообложение сделок с криптовалютами требует их легализации. Такое мнение высказал глава комитета Госдумы по законодательству Павел Крашенинников, пишет «Интерфакс».

В частности, по словам Крашенинникова, сделки с криптовалютами нужно легализовать из-за выбранного пути по их налогообложению.

«С одной стороны, ее [криптовалюту] не признают объектом, с другой стороны, правительство внесло законопроект о том, что ее нужно облагать налогом», — подчеркнул глава комитета.

Присоединяйтесь к нашему телеграм-каналу, чтобы быть в курсе главных трендов крипторынка.

Он также подчеркнул, что решение обложить криптовалюту налогом должно основываться на легальности таких операций. При этом, Крашенинников предложил легализовать оборот криптовалют по примеру наркотических препаратов.

«Пускай такие валюты будут ограниченно оборотоспособны, как это, допустим, происходит с наркотическими препаратами», — отметил Крашенинников.

По мнению Крашенинникова, властям нужно утвердить хоть «какое-то регулирование», если криптовалюта будет признана на законодательном уровне.

Отечественное

нерегулирование криптовалют

Комментарии Крашенинникова звучат после того, как Госдума приняла в первом чтении законопроект об обязательном декларировании криптовалют. При этом, редакция BeInCrypto сообщала, что Совет при Президенте РФ не поддержал законопроект, сославшись на большую правовую неопределенность.

Тогда же Крашенинников подчеркнул, что в ГК РФ нет термина «цифровой валюты». Однако в принятом законе «О цифровых финансовых активах» цифровая валюта рассматривается как ограниченный тип платежного средства.

Узнайте, как торговать на криптовалютном рынке вместе с партнером BeInCrypto — криптовалютной биржей StormGain

Напомним, законопроект предусматривает обязательное налогообложение физлиц и юрлиц в случае, если годовые криптоинвестици превышают сумму в ₽600 тыс.

Вдобавок, законопроект предлагает ответственность за неуведомление ФНС РФ об инвестициях в криптовалюту. В случае принятия закона, налоговая сможет требовать банковские выписки по счетам, участвующим в обороте криптовалют.

Что вы думаете? Делитесь с нами своими мыслями в комментариях и присоединяйтесь к дискуссии в нашем Телеграм-канале.

Дисклеймер

Вся информация, содержащаяся на нашем вебсайте, публикуется на принципах добросовестности и объективности, а также исключительно с ознакомительной целью. Читатель самостоятельно несет полную ответственность за любые действия, совершаемые им на основании информации, полученной на нашем вебсайте.

Татьяна Омельченко | Мемориальный онкологический центр Слоуна-Кеттеринга

Татьяна Омельченко | Мемориальный онкологический центр Слоуна-Кеттеринга - Academia.edu

Academia.edu больше не поддерживает Internet Explorer.

Для более быстрого и безопасного просмотра Academia.edu и всего Интернета, пожалуйста, обновите свой браузер за несколько секунд.

Документы

Подвижное поведение эпителиальных клеток, расположенных на краю большой раны в монослое Cu. .. подробнее Проанализировано подвижное поведение эпителиальных клеток, расположенных на краю большой раны в монослое культивируемых клеток. Первым клеточным ответом является выравнивание края с сопутствующим образованием тангенциальных маргинальных пучков актина внутри отдельных клеток, расположенных вдоль края раны. Позднее происходит когерентное разрастание клеточных масс за счет образования особых «лидерных» клеток на вершинах разрастаний и «последовательных» клеток по бокам. Клетки-лидеры обнаруживают глубокую реорганизацию цитоскелета, включая разборку маргинальных пучков, перестройку пучков актиновых филаментов и проникновение микротрубочек в высокоактивные ламеллы.Кроме того, межклеточные контакты приобретают радиальную геометрию, указывающую на повышенное сократительное напряжение. Интересно, что лидерные клетки приобретают цитоскелетную организацию и подвижность, типичные для фибробластов. Культуры IAR-2, стабильно трансфицированные доминантно-отрицательным мутантом RhoA или обработанные ингибитором Rho-киназы Y-27632, трансформировали большинство краевых клеток в лидерные клетки. Альтернативно, трансфекция клеток с конститутивно активным RhoA подавляла образование лидеров. Таким образом, расширение эпителиального листа включает функциональную дифференциацию на два различных типа краевых клеток.Переход между этими двумя паттернами контролируется активностью Rho, которая, в свою очередь, контролирует динамическое распределение и активность пучков актиновых филаментов, миозина II и микротрубочек.

PaperRank:

Читатели Связанные статьи УпоминанияView Impact

PaperRank:

Читатели Связанные статьи УпоминанияView Impact КОММЕНТАРИЙ Комментарий к: Омельченко Т., Холл А. Myosin-IXA регулирует коллективные эпителиальные клетки м ... подробнее КОММЕНТАРИЙ Комментарий к: Омельченко Т., Холл A. Myosin-IXA регулирует коллективную миграцию эпителиальных клеток, направляя активность RhoGAP на межклеточные соединения.Коллективная миграция клеток является ключевым процессом во время морфогенеза эпителия, регенерации тканей и распространения опухоли. Во время коллективной эпителиальной миграции передне-задняя полярность, апикально-базальная полярность и соединения клетка-клетка д. Быть динамически скоординированными, но лежащие в основе молекулярные механизмы, контролирующие это сложное поведение, неясны. Rho GTPases регулируют актиновый цитоскелет, в частности, протрузию и сократительную активность в межклеточных контактах. Недавно был идентифицирован ряд регуляторов - факторов обмена нуклеотидов (GEFs) и белков, активирующих GTPase (GAPs), и было предложено обеспечить пространственно-временной контроль Rho GTPases в межклеточных контактах.Одним из них является миозин IXA, член класса IX, одноголовые актиновые моторы, имеющие консервативный домен RhoGAP. Используя свою актин-связывающую и моторную активность, миозин IX взаимодействует с актиновыми филаментами и движется к плюс-концам филаментов. На плазматической мембране активность RhoGAP миозина IX негативно регулирует Rho, облегчая локальную реорганизацию актинового цитоскелета. Здесь я обсуждаю, как myosin IXA регулирует Rho и актиновый цитоскелет во время сборки возникающих межклеточных контактов и как это может вносить вклад в коллективную миграцию эпителия.

PaperRank:

Читатели Статьи по теме УпоминанияView ImpactCell Миграция и перестройка клеток имеют решающее значение для построения плана тела позвоноч ... подробнее Миграция клеток и перестройка клеток имеют решающее значение для построения плана тела эмбрионов позвоночных. Первый шаг в организации плана тела эмбриона мыши, определение передне-задней оси тела, зависит от миграции передней висцеральной энтодермы от дистального конца эмбриона в более проксимальную область, лежащую над будущей головой.Передняя висцеральная энтодерма (AVE) представляет собой кластер внеэмбриональных клеток, которые секретируют ингибиторы путей Wnt и Nodal для подавления заднего развития. Поскольку белки Rac являются критическими регуляторами миграции клеток, а мутанты Rac1 мыши умирают на ранней стадии развития, мы проверили, играет ли Rac1 роль в миграции AVE. Здесь мы показываем, что мутантные эмбрионы Rac1 неспособны специфицировать передне-заднюю ось и вместо этого экспрессируют задние маркеры в виде кольца вокруг эмбриональной окружности. Клетки, которые экспрессируют молекулярные маркеры AVE, правильно определены в мутантах Rac1, но остаются на дистальном конце эмбриона в то время, когда должна иметь место миграция.Используя тканеспецифичные делеции, мы показали, что Rac1 действует автономно внутри висцеральной энтодермы, способствуя миграции клеток. Визуализация с высоким разрешением показывает, что ведущие клетки AVE дикого типа расширяют длинные ламеллярные выступы, которые охватывают несколько диаметров клеток и поляризованы в направлении движения клеток. Эти проекции украшены подобными филоподиям структурами, которые, кажется, образуют образцы окружающей среды. Клетки AVE дикого типа обнаруживают признаки коллективной миграции клеток: они сохраняют плотные и слипшиеся соединения, когда они мигрируют и обмениваются соседями в плоскости эпителия висцеральной энтодермы.Анализ мутантных эмбрионов показывает, что Rac1 не требуется для межклеточной передачи сигналов, выживания, пролиферации или адгезии в висцеральной энтодерме, но необходим для способности клеток висцеральной энтодермы расширять выступы, изменять форму и обмениваться соседями. Данные показывают, что Rac1-обеспечиваемая эпителиальная миграция AVE является критическим шагом в установлении плана тела млекопитающих и подтверждают, что Rac1 важен для коллективной миграции в тканях млекопитающих.

PaperRank:

Читатели Упоминания по темеПросмотреть влияние Морфогенез и стабильность эпителия важны для нормального развития и гомеостаза органов... подробнее Морфогенез и стабильность эпителия необходимы для нормального развития и гомеостаза органов. Нервная пластинка мыши представляет собой кубовидный эпителий, который ремоделируется в столбчатый псевдостратифицированный эпителий в течение 24 часов. Здесь мы показываем, что переход к столбчатому эпителию не удается у мутантных эмбрионов, у которых отсутствует опухолевый супрессор PTEN, хотя маркеры пролиферации, формирования паттерна и апикально-базальной полярности у мутантов нормальны. Фенотип Pten имитируется конститутивной активацией киназы PI3 и устраняется удалением PDK1 (PDPK1), но не зависит от нижестоящих киназ AKT и mTORC1. Визуализация с высоким разрешением показывает, что PTEN необходим для стабилизации плоской упаковки клеток в нервной пластинке и для образования стабильных апикально-базальных массивов микротрубочек. Данные подтверждают, что соответствующие уровни ассоциированной с мембраной PDPK1 необходимы для стабилизации апикальных соединений, что способствует удлинению клеток во время морфогенеза эпителия.

PaperRank:

Читатели Упоминания по темеПросмотреть влияние

PaperRank:

Читатели Упоминания по темеПросмотр воздействияПодвижное поведение эпителиальных клеток, расположенных на краю большой раны в монослое Cu... подробнее Проанализировано подвижное поведение эпителиальных клеток, расположенных на краю большой раны в монослое культивируемых клеток. Первым клеточным ответом является выравнивание края с сопутствующим образованием тангенциальных маргинальных пучков актина внутри отдельных клеток, расположенных вдоль края раны. Позднее происходит когерентное разрастание клеточных масс за счет образования особых «лидерных» клеток на вершинах разрастаний и «последовательных» клеток по бокам. Клетки-лидеры обнаруживают глубокую реорганизацию цитоскелета, включая разборку маргинальных пучков, перестройку пучков актиновых филаментов и проникновение микротрубочек в высокоактивные ламеллы.Кроме того, межклеточные контакты приобретают радиальную геометрию, указывающую на повышенное сократительное напряжение. Интересно, что лидерные клетки приобретают цитоскелетную организацию и подвижность, типичные для фибробластов. Культуры IAR-2, стабильно трансфицированные доминантно-отрицательным мутантом RhoA или обработанные ингибитором Rho-киназы Y-27632, трансформировали большинство краевых клеток в лидерные клетки. Альтернативно, трансфекция клеток с конститутивно активным RhoA подавляла образование лидеров. Таким образом, расширение эпителиального листа включает функциональную дифференциацию на два различных типа краевых клеток.Переход между этими двумя паттернами контролируется активностью Rho, которая, в свою очередь, контролирует динамическое распределение и активность пучков актиновых филаментов, миозина II и микротрубочек.

PaperRank:

Читатели Связанные статьи УпоминанияView Impact

PaperRank:

Читатели Связанные статьи УпоминанияView Impact КОММЕНТАРИЙ Комментарий к: Омельченко Т., Холл А. Myosin-IXA регулирует коллективные эпителиальные клетки м ... подробнее КОММЕНТАРИЙ Комментарий к: Омельченко Т., Холл A. Myosin-IXA регулирует коллективную миграцию эпителиальных клеток, направляя активность RhoGAP на межклеточные соединения.Коллективная миграция клеток является ключевым процессом во время морфогенеза эпителия, регенерации тканей и распространения опухоли. Во время коллективной эпителиальной миграции передне-задняя полярность, апикально-базальная полярность и соединения клетка-клетка д. Быть динамически скоординированными, но лежащие в основе молекулярные механизмы, контролирующие это сложное поведение, неясны. Rho GTPases регулируют актиновый цитоскелет, в частности, протрузию и сократительную активность в межклеточных контактах. Недавно был идентифицирован ряд регуляторов - факторов обмена нуклеотидов (GEFs) и белков, активирующих GTPase (GAPs), и было предложено обеспечить пространственно-временной контроль Rho GTPases в межклеточных контактах. Одним из них является миозин IXA, член класса IX, одноголовые актиновые моторы, имеющие консервативный домен RhoGAP. Используя свою актин-связывающую и моторную активность, миозин IX взаимодействует с актиновыми филаментами и движется к плюс-концам филаментов. На плазматической мембране активность RhoGAP миозина IX негативно регулирует Rho, облегчая локальную реорганизацию актинового цитоскелета. Здесь я обсуждаю, как myosin IXA регулирует Rho и актиновый цитоскелет во время сборки возникающих межклеточных контактов и как это может вносить вклад в коллективную миграцию эпителия.

PaperRank:

Читатели Статьи по теме УпоминанияView ImpactCell Миграция и перестройка клеток имеют решающее значение для построения плана тела позвоноч ... подробнее Миграция клеток и перестройка клеток имеют решающее значение для построения плана тела эмбрионов позвоночных. Первый шаг в организации плана тела эмбриона мыши, определение передне-задней оси тела, зависит от миграции передней висцеральной энтодермы от дистального конца эмбриона в более проксимальную область, лежащую над будущей головой. Передняя висцеральная энтодерма (AVE) представляет собой кластер внеэмбриональных клеток, которые секретируют ингибиторы путей Wnt и Nodal для подавления заднего развития. Поскольку белки Rac являются критическими регуляторами миграции клеток, а мутанты Rac1 мыши умирают на ранней стадии развития, мы проверили, играет ли Rac1 роль в миграции AVE. Здесь мы показываем, что мутантные эмбрионы Rac1 неспособны специфицировать передне-заднюю ось и вместо этого экспрессируют задние маркеры в виде кольца вокруг эмбриональной окружности. Клетки, которые экспрессируют молекулярные маркеры AVE, правильно определены в мутантах Rac1, но остаются на дистальном конце эмбриона в то время, когда должна иметь место миграция.Используя тканеспецифичные делеции, мы показали, что Rac1 действует автономно внутри висцеральной энтодермы, способствуя миграции клеток. Визуализация с высоким разрешением показывает, что ведущие клетки AVE дикого типа расширяют длинные ламеллярные выступы, которые охватывают несколько диаметров клеток и поляризованы в направлении движения клеток. Эти проекции украшены подобными филоподиям структурами, которые, кажется, образуют образцы окружающей среды. Клетки AVE дикого типа обнаруживают признаки коллективной миграции клеток: они сохраняют плотные и слипшиеся соединения, когда они мигрируют и обмениваются соседями в плоскости эпителия висцеральной энтодермы.Анализ мутантных эмбрионов показывает, что Rac1 не требуется для межклеточной передачи сигналов, выживания, пролиферации или адгезии в висцеральной энтодерме, но необходим для способности клеток висцеральной энтодермы расширять выступы, изменять форму и обмениваться соседями. Данные показывают, что Rac1-обеспечиваемая эпителиальная миграция AVE является критическим шагом в установлении плана тела млекопитающих и подтверждают, что Rac1 важен для коллективной миграции в тканях млекопитающих.

PaperRank:

Читатели Упоминания по темеПросмотреть влияние Морфогенез и стабильность эпителия важны для нормального развития и гомеостаза органов... подробнее Морфогенез и стабильность эпителия необходимы для нормального развития и гомеостаза органов. Нервная пластинка мыши представляет собой кубовидный эпителий, который ремоделируется в столбчатый псевдостратифицированный эпителий в течение 24 часов. Здесь мы показываем, что переход к столбчатому эпителию не удается у мутантных эмбрионов, у которых отсутствует опухолевый супрессор PTEN, хотя маркеры пролиферации, формирования паттерна и апикально-базальной полярности у мутантов нормальны. Фенотип Pten имитируется конститутивной активацией киназы PI3 и устраняется удалением PDK1 (PDPK1), но не зависит от нижестоящих киназ AKT и mTORC1.Визуализация с высоким разрешением показывает, что PTEN необходим для стабилизации плоской упаковки клеток в нервной пластинке и для образования стабильных апикально-базальных массивов микротрубочек. Данные подтверждают, что соответствующие уровни ассоциированной с мембраной PDPK1 необходимы для стабилизации апикальных соединений, что способствует удлинению клеток во время морфогенеза эпителия.

PaperRank:

Читатели Упоминания по теме Просмотр воздействия

PaperRank:

Читатели Упоминания по теме Просмотр воздействия Войти с Facebook
Войти с Google

Зарегистрироваться с Apple

β-Pix управляет коллективной миграцией клеток передней висцеральной энтодермы в раннем эмбрионе мыши

  1. Алан Холл 1
  1. 1 Программа клеточной биологии,
  2. 2 Программа биологии развития, Мемориальный онкологический центр Слоуна Кеттеринга, Нью-Йорк, Нью-Йорк 10065, США
  1. Авторы для переписки: omelchet mskcc. org, halla {at} mskcc.org

Аннотация

Коллективная миграция эпителия важна на протяжении всего эмбрионального развития. Основные механизмы плохо изучены но, вероятно, включает пространственно локализованную активацию Rho GTPases. Ранее мы сообщали, что Rac1 необходим для генерации протрузивная активность, которая управляет коллективной миграцией клеток передней висцеральной энтодермы (AVE) у ранних мышей эмбрион.Чтобы идентифицировать потенциальные регуляторы Rac1, мы сначала выполнили РНКи-скрининг факторов обмена семейства Rho (гуанин фактор обмена нуклеотидов [GEF]) в анализе коллективной миграции эпителия in vitro и идентифицировал β-Pix. Генетическое удаление β-Pix у мышей нарушает коллективную миграцию AVE, тогда как визуализация в реальном времени с высоким разрешением показала, что это связано со случайным направленная протрузивная активность. Мы пришли к выводу, что β-Pix контролирует пространственную локализацию активности Rac1, чтобы управлять коллективным Миграция AVE на критическом этапе развития мышей.

  • Поступила 19.08.2014.
  • Принята к печати 29 октября 2014 г.

Биолог развития Кэтрин Андерсон умерла в возрасте 68

Кэтрин Андерсон, биолог развития из Мемориального онкологического центра им. Слоуна Кеттеринга, известная своей работой по детализации генетики раннего эмбриогенеза, умерла 30 ноября в возрасте 68 лет.

На протяжении всей своей научной карьеры Андерсон использовала строгие генетические анализы для выявления мутаций, подозреваемых в нарушении деления и дифференцировки клеток в модельных системах. Выявив интересующий ген, она затем обратилась к методике, известной как прямая генетика, создавая модельные организмы, такие как дрозофилы и мыши с определенным фенотипом, чтобы лучше понять его молекулярную основу. Используя эти инструменты, Андерсон внес важный вклад в понимание учеными нескольких генетических путей, в первую очередь путей Toll и Hedgehog, необходимых для правильного развития этих животных.

«Кэтрин была бесстрашной и очень непредубежденной», - говорит The Scientist Татьяна Омельченко, старший научный сотрудник лаборатории Андерсона, которая использует конфокальную микроскопию для получения изображений эмбрионов мыши в реальном времени. «В каждой лаборатории своя среда и свое настроение, и, войдя в лабораторию Кэтрин, вы сразу почувствовали себя очень сосредоточенными».

Андерсон родилась в Ла-Хойе, Калифорния, в 1952 году. Она заинтересовалась наукой в ​​юном возрасте, благодаря статье в LIFE , которая включала подробное изображение человеческого зародыша, согласно интервью, опубликованному вскоре после ее смерти. .Она училась в Калифорнийском университете в Беркли, где получила степень бакалавра биохимии, прежде чем отправиться в аспирантуру по нейроразвитию в Стэнфордском университете в 1973 году.

Андерсон покинул эту программу всего через два года, получив степень магистра нейробиологии, следующие несколько лет провела в поисках своей научной ниши. Она на короткое время поступила в медицинский институт Калифорнийского университета в Сан-Диего, и этот опыт помог ей реализовать свою любовь к фундаментальным исследованиям.«Клиническая работа была не для меня», - поделился Андерсон в биографии 2005 года. «В лаборатории я чувствовал себя как дома».

В конце концов, Андерсон приземлился в Калифорнийском университете в Лос-Анджелесе, где изучал генетику развития Drosophila под руководством биолога Джудит Ленджел. В своей кандидатской работе Андерсон показала, что в первые два часа после оплодотворения развитие эмбрионов Drosophila остается под материнским контролем, а материнская РНК и белки управляют делением и дифференцировкой клеток внутри яйца.

В поисках дальнейшего изучения плодовых мух Андерсон поехала в Институт биологии развития Макса Планка в Германии в качестве постдока для работы с генетиком Drosophila Кристиан Нюсслейн-Фольхард. В 1995 году Нюсслейн-Фольхард разделила Нобелевскую премию за свою работу, используя массовые скрининги для выявления мутаций, нарушающих эмбриональное развитие, а Андерсон продолжала изучать несколько генов, идентифицированных на этих ранних скринингах, на протяжении всей своей карьеры.

Один из таких генов, известный как Toll , как оказалось, играет важную роль в дорсально-вентральной (D-V) дифференцировке, определяя, как Андерсон сказала в своей биографии, как эмбрион мухи «узнает свою спину от своего живота».В дополнение к исследованию функции Toll, Anderson продолжила строительство более широкой дороги Toll после возвращения в Калифорнийский университет в Беркли в качестве доцента в 1985 году, а затем в свою собственную лабораторию в Институте Слоана Кеттеринга, который она была запущена в 1996 году в Мемориале Слоан Кеттеринг. За это время Андерсон и ее команда идентифицировали около дюжины генов, участвующих в дифференцировке клеток по оси D-V, и она использовала аналогичные методы скрининга, чтобы лучше понять роль Толля в врожденном иммунитете Drosophila .Ее находки были отмечены генетиками Жюлем Хоффманном и Брюсом Бейтлером, чье исследование Toll-подобных рецепторов как у плодовой мухи, так и у иммунитета млекопитающих позже принесло им Нобелевскую премию.

Кэтрин Андерсон

Онкологический центр Мемориал Слоан-Кеттеринг

После своих успехов с плодовыми мушками Андерсон начала думать о применении тех же методов для изучения мышей. Она провела год в творческом отпуске в лаборатории Розы Беддингтон в Национальном институте медицинских исследований в Великобритании, где она показала, что Толл не играет аналогичной роли в дифференцировке D-V млекопитающих.Это продемонстрировало, как она сказала в интервью 2016 года для Development , что «есть вещи в раннем развитии млекопитающих, которые вы не можете понять, экстраполируя с мух».

Вернувшись в Институт Слоуна-Кеттеринга, Андерсон снова начал использовать массовые генетические исследования, на этот раз для выявления представляющих интерес мутаций у мышей, а затем изучил их до мельчайших деталей. Это были длительные эксперименты, на получение результатов которых часто уходили годы. «Я думаю, что ее главный вклад - это открытие функций и ролей генов через этот мутагенез», - говорит Омельченко.«Это потрясающе, потому что. . . модель эмбриона мыши довольно сложна, но она сделала всю работу ».

Андерсон и ее команда проверили более 12 000 мутаций, отобрав примерно 40, которые вызывают очевидные фенотипические нарушения в середине беременности. Усердно работая на протяжении многих лет, Андерсон выявил ранее неизвестные пути, которые с тех пор открыли новые направления исследований в области биологии развития.

Путем своего скрининга, например, Андерсон определила ранее неизвестную связь между ресничками - микроскопическими, похожими на волосы структурами на внешней стороне некоторых клеток - и надлежащей передачей сигналов пути Hedgehog, который диктует дифференцировку клеток в эмбрионах млекопитающих. Дальнейшие исследования показали, что компоненты этого пути обогащены ресничками, в то время как мыши с определенными мутациями в генах, участвующих в передаче сигналов Hedgehog, вообще лишены ресничек в структуре, называемой узлом, который управляет гаструляцией у эмбрионов позвоночных. «На самом деле это оказалось довольно удивительно: вся эта органелла необходима для передачи сигналов Hedgehog у позвоночных, но не у мух», - сказала Андерсон в своем интервью Development . «Это мечта генетика, но возникает вопрос, зачем организовывать геном таким образом: в передаче сигналов Hedgehog так много слабых мест, а Hedgehog жизненно важен.

За свой вклад в область биологии развития Андерсон была принята в Национальную академию наук в 2002 году и избрана членом Института медицины национальных академий в 2008 году. Кроме того, она была награждена премией Томаса Ханта. Медаль Моргана за пожизненный вклад в науку генетики в 2012 году, Федерация американских обществ за выдающиеся достижения в области науки экспериментальной биологии в 2014 году и Эдвин Дж. Общество биологии развития.Медаль Конклина за выдающиеся и постоянные исследования в 2016 году, среди прочих наград.

Перед своей смертью Андерсон говорила о возможном расширении своих исследований в области генетики человека, поскольку с тех пор нарушения передачи сигналов hedgehog были связаны как с врожденными дефектами, так и с рядом заболеваний, называемых цилиопатиями. Однако это была линия вопросов, которую она планировала оставить другим ученым, довольствуясь продолжением своей методической работы по изучению мутаций у мышей.

«Многие ученые - очень тихие люди, но современное общество требует, чтобы вы были очень громкими, чтобы люди вас слушали», - говорит Омельченко.«Кэтрин - отличный пример того, как вести себя тихо, быть очень глубоким мыслителем и в то же время стать очень успешным и ярким ученым. Думаю, я буду продолжать учиться у нее, даже если она скончалась ».

У Андерсон остался муж, Тимоти Бестор, генетик из Колумбийского университета.

Супрессор опухолей PTEN и киназа PDK1 регулируют образование столбчатого нервного эпителия

Эмбрионы мышей, у которых отсутствует PTEN, имеют беспрецедентный дефект морфогенеза нервной трубки. У мутантных эмбрионов Pten образуется нейральный эпителий SOX2 +, который обнаруживает нормальную сегрегацию апикальных и базальных маркеров, формируется с помощью сигналов развития и нормально размножается. Однако мутантный головной нейральный эпителий не может претерпевать переход от кубовидного к высокому столбчатому псевдостратифицированному эпителию; вместо этого мутантная нервная пластинка тонкая, широкая и нерегулярно сложенная, а закрытие головной нервной трубки полностью не удается.

Фосфоинозитиды были описаны как ключевые регуляторы апикально-базальной полярности (Martin-Belmonte et al., 2007; Shewan et al., 2011), и действительно, мутанты Pten имеют глубокий дефект в организации третьего (апикально-базального) измерения нервного эпителия. Однако традиционные маркеры апикально-базальной полярности правильно локализованы в нервной пластинке мутанта Pten : Par3, aPKC, ZO1, P-ERM, N-кадгерин и F-актин локализуются апикально, а ламинин локализуется базально. На основании обогащения pAKT как апикальной, так и базолатеральной мембран мутантной нервной пластинки Pten , маркеры апикально-базальной полярности локализованы правильно, несмотря на высокие уровни PtdIns (3,4,5) P 3 во всех клеточных мембранах.

Несмотря на важную роль фосфоинозитидов в передаче сигналов mTOR, эндоцитарной сортировке, рециклинге и торговле (Di Paolo and De Camilli, 2006; Shewan et al., 2011; Dibble and Cantley, 2015), генетические и химико-генетические данные демонстрируют, что все фенотипы в нервной пластинке Pten опосредованы повышенной активностью PDPK1. Хотя фосфорилированный AKT обогащен всеми клеточными мембранами в мутантной нервной пластинке, ингибирование нижележащих киназ AKT или mTor не изменяет фенотип мутанта Pten , тогда как удаление Pdpk1 спасает все аспекты фенотипа Pten .Таким образом, мы делаем вывод, что именно несоответствующая PtdIns (3,4,5) P 3 -стимулируемая активность PDPK1, а не изменения уровней других фосфоинозитидов или активности AKT или mTorc1, опосредуют все наблюдаемые морфогенетические дефекты. в мутантном нервном эпителии Pten .

Возможно, наиболее разительным клеточным различием между Pten и клетками нервной пластинки дикого типа является отсутствие стабильных апикально-базальных массивов микротрубочек у мутанта. Формирование нецентросомных наборов апикобазальных микротрубочек с апикальными минус-концами и базальными плюс-концами является отличительной чертой столбчатого эпителия (Bré et al., 1987; Яулин и Крейцер, 2010). В соответствии с требованием массивов микротрубочек для апикально-базального переноса столбчатого эпителия (Jaulin and Kreitzer, 2010; Rodriguez-Boulan and Macara, 2014), базальный транспорт апикально эндоцитозированного трансферрина не работает в нервной пластинке Pten . Недавняя работа показала, что PTEN может напрямую связываться с пузырьками, ассоциированными с микротрубочками (Naguib et al., 2015), указывая тем самым, что PTEN может играть прямую роль в перемещении от апикального к базальному направлениям в нервной пластинке. Данные показывают, что PTEN необходим для организации стабильных массивов апикально-базально ориентированных микротрубочек, которые могут как стабилизировать длинную ось клетки, так и способствовать перераспределению мембраны от апикальных к базолатеральным доменам нейроэпителиальных клеток, что приводит к переход от кубовидного эпителия к столбчатому.

На той же стадии (между E8.0 и E8.5), когда нервные клетки дикого типа начинают удлиняться и образовывать массивы апикально-базальных стабильных микротрубочек, клетки нервной пластинки также реорганизуются в плоскости эпителия, чтобы стать более гексагонально упакованы.На E8.0 упаковка клеток как в передней нервной пластинке дикого типа, так и у мутанта Pten является нерегулярной и включает в себя расположение, подобное розетке, которое является признаком динамического эпителия (Blankenship et al., 2006). К ст. E8.5 клетки дикого типа превратились в более регулярный паттерн упаковки, и наблюдается меньшее количество розеток, тогда как нервная пластинка Pten продолжает иметь много расположений клеток, подобных розеткам.

Pten-зависимые, не зависящие от Akt изменения в упаковке клеток также наблюдались в крыловом диске Drosophila , где эффект мутации Pten был приписан дефектам ремоделирования спаек (Bardet et al., 2013). Подобно тому, что мы наблюдали в головной нервной пластинке мыши, мутант Pten , эпителиальные клетки диска крыла мутанта Drosophila Pten имеют меньше соседей, чем видно в регулярном гексагональном массиве. В случае Drosophila высокие уровни миозина-II преимущественно наблюдаются на коротких краях мутантных клеток Pten . Напротив, миозин-II анизотропно распределен как в нервной пластинке мыши дикого типа, так и в мутантной E8.0 мыши, и он может быть обогащен как на длинных, так и на коротких краях клеток.Анизотропное распределение миозина-II сохраняется в мутанте E8.5 Pten , в то время как миозин-II становится обогащенным по всем краям клеток нервной пластинки дикого типа E8.5, вероятно, в рамках подготовки к следующей фазе закрытия нервной трубки. , опосредованное актомиозином апикальное сужение. Таким образом, потеря PTEN блокирует созревание упаковки клеток в нервной пластинке, но нет простой взаимосвязи между фенотипом Pten и распределением миозина-II.

Аномальная плоская упаковка клеток и отсутствие апикально-базальных массивов микротрубочек в нервной пластинке Pten , по-видимому, связаны: они возникают одновременно, и оба зависят от регулируемой активности PDPK1.Связь этих двух фенотипов согласуется с известными связями между апикальными соединениями и массивами микротрубочек. Соединения апикальных сращений являются сайтами закрепления нецентросомных массивов микротрубочек (Meng et al., 2008; Gavilan et al., 2015). Динамика микротрубочек, в свою очередь, может регулировать стабильность слипчивых соединений (Meng et al., 2008; Waterman-Storer et al., 2000), подтверждая существование петли положительной обратной связи, которая соединяет стабильные слипчивые соединения и массивы микротрубочек. Мы предполагаем, что мишень PDPK1 в мутантной нервной пластинке Pten ингибирует стабилизацию апикальных соединений, что, в свою очередь, блокирует образование нецентросомных массивов микротрубочек, необходимых для удлинения клеток в нервной пластинке (рис. 8).Прямая цель PDPK1 в этом процессе неизвестна; одна возможность состоит в том, что несоответствующая активность PDPK1 способствует динамическим колебаниям активности aPKC и / или PKN. PtdIns (3,4,5) P 3 -связанная PDPK1 достаточна для активации этих двух классов киназ (Balendran et al., 2000), а aPKC может регулировать как апикальные соединения, так и организацию микротрубочек (Harris and Tepass, 2008; Harris и Пайфер, 2007).

Модель роли PTEN в формировании псевдостратифицированного столбчатого эпителия.

PDPK1 прикреплен к плазматической мембране с помощью PtdIns (3,4,5) P 3 (PIP3), который продуцируется киназой PI3 (PI3K) и разрушается PTEN. У мутанта Pten увеличение PIP3 рекрутирует высокие уровни PDPK1 в мембрану, где он активируется. Активированная мембранно-ассоциированная PDPK1 имеет две цели: активированная PDPK1 генерирует высокие уровни pAKT; по отдельному пути высокие уровни ассоциированной с мембраной PDPK1 ингибируют образование стабильных апикальных соединений. Стабильные апикальные соединения необходимы для образования стабильных апикально-базальных массивов микротрубочек, которые обеспечивают перемещение от апикального к базальному нервному эпителию, обеспечивая удлинение и плотную упаковку клеток в нервном эпителии. У WT PDPK1 не требуется для образования псевдостратифицированного нервного эпителия, хотя задержка закрытия нервной трубки у мутантов Pdpk1 может отражать тонкую роль белка в организации эпителия.

https: // doi.org / 10.7554 / eLife.12034.021

PTEN выполняет множество ролей в развитии мозга млекопитающих, включая контроль размера клеток (Kwon et al., 2001), дифференцировку и миграцию нейронов (Yue et al., 2005), структуру синапсов и синаптическую пластичность (Fraser et al., 2008; Sperow et al., 2012) и регенерация аксонов (Park et al., 2008). Человеческие мутации в одной копии гена PTEN связаны с множеством аномалий в развитии мозга, включая мегалэнцефалию и фокальную корковую дисплазию, которые могут привести к аутизму и детской эпилепсии (Hevner, 2015; Jansen, et al. , 2015; Чжоу и Парада, 2012). Наши открытия определяют глубокую, очень раннюю роль PTEN в организации мозга, которая, вероятно, вносит вклад в синдромы человека, вызванные гаплонедостаточностью PTEN.

PDPK1-зависимые изменения эпителиальной стабильности также могут играть важную роль в опухолях, в которых отсутствует PTEN. Мутации в пути киназы PI3 чрезвычайно распространены в опухолях: например, почти 80% случаев карциномы эндометрия (не ультрамутантные образцы) имеют инактивирующие мутации в PTEN (Cancer Genome Atlas Research Network et al., 2013) и 45% опухолей молочной железы просвета A человека несут активирующие мутации в PIK3CA (Cancer Genome Atlas Network, 2012). Предыдущие исследования предоставили доказательства того, что независимость от закрепления и рост ксенотрансплантата клеток рака молочной железы, несущих активированный аллель h2047R PI3KCA , зависит от PDPK1, но не от AKT (Gagliardi et al., 2012), и фосфопротеомный анализ клеточных линий с активированными мутациями PI3KCA . случаи, когда активность PDPK1, но не активность AKT, требовалась для канцерогенности (Vasudevan et al., 2009). Представленные здесь данные демонстрируют, что PtdIns (3,4,5) P 3 -зависимая активность PDPK1 является важным следствием отсутствия PTEN in vivo, даже в отсутствие активации AKT. Наши находки подчеркивают важность идентификации соответствующих мишеней PDPK1 во время развития мышей, при связанных с PTEN синдромах развития и в опухолях.

белок-супрессор опухоли LKB1 регулирует сборку актиновых филаментов через Rho и его фактор обмена Dbl независимо от киназной активности | BMC Molecular and Cell Biology

Экспрессия LKB1 вызывает образование стрессовых волокон в клетках HeLa-S3

Клетки HeLa-S3 содержат неопределяемые уровни эндогенного LKB1 [3].Чтобы определить, может ли LKB1 влиять на организацию актиновых филаментов, клетки HeLa-S3 временно трансфицировали плазмидой экспрессии LKB1. Как сообщалось ранее, LKB1 локализуется в ядре и в цитозоле (Fig. 1B). Через 24 часа после трансфекции диффузные тонкие актиновые филаменты, присутствующие в контрольных клетках (фиг. 1A), были реорганизованы с образованием параллельных стрессовых волокон, пересекающих тела клеток (фиг. 1C). Визуализация клеток с антителами против паксиллина показала, что контрольные клетки содержат преимущественно периферические очаговые комплексы (рис.2А, Б). Экспрессия LKB1 индуцирует более классические удлиненные фокальные адгезии, расположенные в теле клетки и связанные с концами пучков актиновых филаментов (Fig. 2C, D, E). Было обнаружено, что небольшая фракция LKB1 связана с плазматической мембраной (Fig. 2C).

Рисунок 1

Экспрессия LKB1 индуцирует сборку актиновых филаментов в клетках HeLa-S3 . Клетки HeLa-S3 трансфицировали различными меченными myc конструкциями LKB1, клонированными в плазмиду экспрессии pRK5. Клетки фиксировали и окрашивали анти-myc-антителом и флуоресцентным фаллоидином для визуализации нитчатого актина. А . Контрольные клетки, экспрессирующие пустой вектор pRK5-myc, отображали в основном кортикальные актиновые филаменты и несколько тонких актиновых филаментов по телам клеток. Б-Е . Экспрессия LKB1 дикого типа (B и C) или мертвой киназы (D194A), меченного myc (D и E), приводила к образованию актиновых филаментов в клетках HeLa-S3. Как LKB1 дикого типа, так и мертвые киназы LKB1 были обнаружены в ядре и в цитоплазме. F, G . С-конец LKB1 не индуцирует актиновые филаменты. Н . Доменная структура LKB1 и конструкции, использованные в статье.Указаны критические аминокислоты. Я . Количественная оценка влияния LKB1 на формирование актиновых волокон (стрессовых волокон). Экспрессирующие клетки оценивали по образованию стрессовых волокон (пучки актиновых филаментов через тела клеток). Масштабная линейка = 20 мкм.

Рисунок 2

LKB1 способствует образованию очаговой адгезии в клетках HeLa-S3 . А.Б. . Контрольные клетки HeLa-S3, окрашенные паксиллином, выявляют небольшие периферические очаговые комплексы, которые локализуются вместе с кортикальным актином. С-Е .Экспрессия LKB1, меченного myc, вызывает удлиненные очаговые адгезии по всему телу клетки, которые украшают концы вновь образованных стрессовых волокон. Фракция сверхэкспрессированного белка LKB1 присутствует на клеточной мембране. Масштабная линейка = 20 мкм.

Киназный домен LKB1 необходим для формирования стрессовых волокон и фокальной адгезии, но киназная активность отсутствует.1H). Две киназно-мертвые мутантные конструкции LKB1 (D194A и T189A) были способны индуцировать стрессовые волокна, а также LKB1 дикого типа (рис. 1D, E, I). Однако мутантные конструкции, лишенные киназного домена, утратили способность образовывать стрессовые волокна (рис. 1F, G, I). Конструкции, кодирующей только киназный домен LKB1 (KIN WT) или мертвый киназный домен киназы (KIN KD), было достаточно, чтобы способствовать образованию стрессовых волокон в клетках HeLa-S3 (рис.

1H, I).

Формирование стрессовых волокон требует RhoA

Rho GTPases являются важными регуляторами сборки актиновых филаментов, и их участие в LKB1-индуцированном образовании стрессовых волокон было изучено.Клетки HeLa-S3 трансфицировали пулами siRNA SMART, нацеленными на различных членов семейства Rho (RhoA, RhoB, RhoC, Rac1, Rac3 и Cdc42), и через 2 дня клетки повторно трансфицировали конструкцией экспрессии LKB1 дикого типа, меченной myc. Истощение RhoA предотвращало образование стрессовых волокон после экспрессии LKB1 (Fig. 3D, E), но истощение других Rho GTPases не имело эффекта (данные не показаны). Эффект истощения RhoA с помощью siRNA SMARTpool был подтвержден с использованием 4 отдельных дуплексов siRNA (рис. 3H), каждый из которых эффективно истощал уровни RhoA (рис.3I). Котрансфекция доминантно-негативной формы RhoA (GFP-N19RhoA) с LKB1 также блокировала образование стрессовых волокон (фиг. 4D-F), в то время как доминантно-негативная форма Cdc42 (GFP-N17Cdc42) не блокировала (фиг. 4A-C). ROCK (rho kinase) является важным эффектором RhoA, участвующим в формировании актиновых стрессовых волокон [16]. Клетки, экспрессирующие LKB1, обрабатывали ингибитором ROCK Y-27632 (10 мкМ) в течение 6 часов, и это полностью ингибировало образование стрессовых волокон, как ожидалось (данные не показаны). Эти эксперименты предполагают, что LKB1 индуцирует сборку актиновых филаментов посредством активации пути RhoA / ROCK и что это является прямым, а не через активацию Cdc42 или Rac.

Рисунок 3

Формирование стрессовых волокон опосредуется RhoA и Dbl . Клетки HeLa-S3 трансфицировали siRNA, а затем через 2 дня повторно трансфицировали LKB1 дикого типа, меченный myc. А . Клетки HeLa-S3 трансфицировали контрольной миРНК, а через 2 дня вводили пустой вектор. В, С . Клетки трансфицировали контрольной миРНК, а через 2 дня - конструкцией LKB1, меченной myc. D, E . Клетки, трансфицированные RhoA siRNA SMARTpool, с последующим введением через 2 дня конструкции LKB1 с myc-меткой. F, G . Клетки трансфицировали siRNA Dbl SMARTpool с последующим введением через 2 дня конструкции LKB1, меченной myc. Н . Количественная оценка образования стрессовых волокон. Четыре индивидуальных siRNA (1-4) и SMARTpool (sp) показаны для RhoA, а две отдельные siRNA (1,2) и SMARTpool (sp) показаны для Dbl. Я . Вестерн-блоттинг показывает эффективность отдельных миРНК в истощении эндогенных белков RhoA и Dbl. Лизаты клеток собирали через 3 дня после трансфекции миРНК. Масштабная линейка = 20 мкм.

Рисунок 4

Доминантно-отрицательный RhoA ингибирует образование стрессовых волокон . А-С . Клетки котрансфицировали конструкциями GFP-DN-Cdc42 (N17Cdc42) и pRK5-myc-LKB1. Д-Ф . Клетки котрансфицировали GFP-DN-RhoA (N19RhoA) и pRK5-myc-LKB1. Подсчитывали клетки, экспрессирующие как GFP, так и myc, и оценивали образование стрессовых волокон. Масштабная линейка = 20 мкм.

Экспрессия LKB1 приводит к активации RhoA

Чтобы определить, вызывает ли экспрессия LKB1 активацию (т. е.е. GTP-загрузка) Rho, a Rho. Анализ GTP-pulldown проводили на лизатах клеток HeLa-S3 с использованием слитого белка GST-rhotekin, присоединенного к агарозе. Экспрессия LKB1 дикого типа или киназно-мертвого LKB1 приводила к 3-4-кратному увеличению уровней RhoA.GTP по сравнению с контрольными клетками, тогда как экспрессия C-конца LKB1 не оказывала заметного эффекта (фиг. 5).

Фигура 5

Экспрессия LKB1 активирует RhoA в клетках HeLa-S3 . Клетки трансфицировали различными конструкциями LKB1 и через 24 часа после трансфекции оставляли без сыворотки в течение 12 часов.Клетки собирали и активировали Rho. Уровни GTP определяли с помощью стандартного метода анализа. LKB1 дикого типа и мертвый киназный LKB1 (D194A) индуцируют 3-4-кратное увеличение уровней активного RhoA по сравнению с ложно-трансфицированными клетками, тогда как экспрессия С-концевого фрагмента LKB1 не имеет никакого эффекта.

Формирование стрессовых волокон требует фактора обмена Dbl

Факторы обмена гуаниновых нуклеотидов (GEF) катализируют обмен GDP на GTP на Rho GTPases для активации конформационного переключателя. Описанные выше эксперименты повышают вероятность того, что LKB1 активирует GEF, специфичный для Rho [17]. Сообщается, что из 82 GEF, закодированных в геноме человека, 22 обладают активностью, специфичной для Rho (дополнительный файл 1). Клетки HeLa-S3 трансфицировали пулами siRNA SMART, нацеленными на каждый из этих GEF, и через два дня клетки повторно трансфицировали конструкцией экспрессии LKB1. Истощение одного GEF, Dbl, эффективно блокирует образование стрессовых волокон, индуцированное LKB1 (рис. 3F, G, H). Этот эффект был подтвержден с использованием двух индивидуальных дуплексов siRNA Dbl, оба из которых истощали эндогенный белок Dbl, судя по вестерн-блоттингу (рис.3Н, I).

Домен киназы LKB1 взаимодействует с доменом DH / PH Dbl

Белок Dbl состоит из нескольких распознаваемых доменов, включая домен DH из 200 остатков (гомология Dbl), примыкающий к домену PH из 100 остатков (гомология плекстрина) (рис. 6A) ). Этот мотив DH / PH отвечает за активность каталитического обмена нуклеотидов в GEF семейства Rho. Чтобы определить, может ли LKB1 взаимодействовать с Dbl, меченый myc полноразмерный LKB1 экспрессировали в клетках HeLa-S3 и иммунопреципитировали с помощью антитела против myc или контрольного антитела IgG.Вестерн-блоттинг с использованием антитела против Dbl выявил совместное осаждение эндогенного Dbl с LKB1 (фиг. 6B). Точно так же иммунопреципитация эндогенного Dbl анти-Dbl антителом приводила к совместной преципитации myc-меченного LKB1 (фиг. 6C). Затем различные конструкции LKB1, меченные myc, экспрессировали в клетках HeLa-S3 и проводили реакции иммунопреципитации с антителом против Dbl. Было обнаружено, что как LKB1 дикого типа, так и мертвые киназы LKB1 (D194A) одинаково хорошо со-преципитируют с эндогенным Dbl (рис.6D, дорожки 2 и 3), но конструкции LKB1, лишенные киназного домена, этого не сделали (фиг. 6D, дорожки 4 и 5).

Рисунок 6

LKB1 взаимодействует с эндогенным Dbl . А . Схематическое изображение прото-Dbl и конструкций, использованных в этой работе. Б . Клетки HeLa-S3, трансфицированные вектором (pRK5myc), или pRK5myc-LKB1 дикого типа. LKB1 иммунопреципитировали из клеточных лизатов с помощью антитела против myc (дорожки 1 и 3) или контрольного IgG (дорожка 2) и анализировали с помощью вестерн-блоттинга.Dbl обнаруживали с помощью антитела Dbl. Примерно 20% эндогенного Dbl было осаждено антителом myc. С . Клетки HeLa-S3, трансфицированные pRK5myc-LKB1. Лизаты клеток подвергали иммунопреципитации с использованием либо контрольного кроличьего IgG (дорожка 1), либо антитела против Dbl (дорожка 2). Две верхние панели представляют собой общие клеточные лизаты, обработанные анти-Dbl и анти-myc антителами. Две нижние панели представляют собой иммунопреципитаты Dbl и IgG, блотированные анти-Dbl и анти-myc антителами. Около 1% сверхэкспрессированного myc-LKB1 осаждали эндогенным Dbl с использованием анти-Dbl. Д . Клетки HeLa-S3, трансфицированные pRK5myc, или pRK5myc кДНК LKB1. Две нижние панели: эндогенный Dbl, иммунопреципитированный из клеточных лизатов анти-Dbl антителом, с последующим вестерн-блоттингом с использованием либо анти-myc, либо анти-Dbl антитела. Верхняя панель: экспрессия LKB1 в общих клеточных лизатах с использованием анти-myc. E . Конструкции Dbl экспрессируются в клетках HEK293T как слитые белки GST и очищаются с использованием глутатион-агарозы. К гранулам добавляли равные количества клеточного лизата, выделенного из клеток, экспрессирующих pRK5myc-LKB1 дикого типа, и LKB1, связанный с гранулами, определяли с помощью вестерн-блот-анализа с использованием антитела против myc (нижняя панель).GST-Dbl и LKB1 были обнаружены с помощью антител против GST и против myc соответственно.

Для идентификации области Dbl, необходимой для взаимодействия с LKB1, различные конструкции Dbl (T1, onco-Dbl, N-Dbl, см. Фиг. 6A) были экспрессированы в клетках HEK293T в виде слитых белков GST. Белки очищали из клеточных лизатов с использованием гранул глутатион-агарозы. Затем равное количество шариков инкубировали с лизатами, полученными из клеток HeLa-S3, экспрессирующих myc-tagged LKB1 дикого типа. LKB1 эффективно захватывается конструкциями Dbl, содержащими домены DH / PH (рис. 6E, T1 и onco-Dbl), но не конструкциями, содержащими только N-концевые регуляторные последовательности (фиг. 6E, N-Dbl). Мы заключаем, что LKB1 взаимодействует с областью DH / PH Dbl.

Коэкспрессия LKB1 с STRAD приводит к образованию актиновой точки

Адаптерный белок LKB1 STRAD облегчает ядерный экспорт LKB1 и необходим для полной активности [10]. Чтобы определить эффект сверхэкспрессии STRAD, экспрессирующие конструкции LKB1, меченные myc, и STRAD, меченные Xpress, котрансфицировали в клетки HeLa-S3.В цитозоле котрансфицированных клеток было обнаружено значительно больше LKB1, чем в клетках, трансфицированных одним LKB1 (сравните фиг. 7, панели 1 и 2 и фиг. 1B). Кроме того, филаменты актина сливаются с образованием точек (фиг. 7, панели 3 и 4), которые связаны с фосфорилированным эзрином (фиг. 7, панели 3-5). Совместная экспрессия STRAD с конструкцией мертвого LKB1 киназы D194A продуцировала аналогичные актиновые точки (данные не показаны). Интересно, что эзрин / актиновые точки локализуются на дорсальной поверхности трансфицированных клеток (рис. 7, панели 6-8 и z-разрез в панели 9).

Фигура 7

Ко-трансфекция LKB1 и STRAD приводит к актиновой точке, связанной с фосфоэзрином . Панели 1 и 2 : Клетки HeLa-S3 трансфицировали myc-LKB1 и pcDNA-HisMax-STRAD. Клетки окрашивали анти-myc или анти-Xpress антителами. LKB1 частично перемещается в цитозоль после экспрессии STRAD. Панели 3-5 : Клетки трансфицировали myc-LKB1 и pcDNA-HisMax-STRAD и визуализировали с помощью антитела против myc, антитела против фосфоэзрина и фаллоидина для визуализации актина.Фосфорилированный эзрин связан с актиновыми точками в трансфицированных клетках. Панели 6-8 : клетки трансфицировали myc-LKB1 и pcDNA-HisMax-STRAD и визуализировали с помощью антитела против myc и антитела против фосфоэзрина. Базальный уровень фосфорилированного эзрина можно увидеть в нетрансфицированных клетках (белые стрелки, панель 7) . Панель 9 : изображение в Z-сечении клеток на панели 7, показывающее точки фосфорилированного эзрина, присутствующие на дорсальной поверхности. Масштабная линейка = 20 мкм.

Как оставаться счастливым и продуктивным во время учебы в трудные времена

Будьте избирательны

Столкнувшись с многочисленными возможностями в университете, возникает соблазн просто сказать «да» всему и сделать все.Мы также можем почувствовать необходимость заполнить наш график из-за дополнительного времени, полученного из-за блокировки. Как человек, движимый смыслом и ценностями, я (Глория) считаю, что в личном росте качество всегда побеждает количество. Избирательность позволит вам участвовать и вносить свой вклад в более значимую работу и, в свою очередь, влияет на то, сколько вы извлекаете из этого опыта.

«« Речь идет о пути, а не о пункте назначения »

Планируйте и используйте приложения для повышения производительности, чтобы не терять концентрацию

Наличие списка дел позволяет мне разбивать большие задачи на более управляемые.Написание эссе на 1500 слов кажется менее сложным, если разделить его на небольшие обязанности. Это также позволяет вам визуализировать, что вам нужно сделать за этот день, и получать это удовлетворение, когда вы вычеркиваете что-то из своего списка.

Исследование также показало, что люди с большей вероятностью будут считать себя ответственными и выполнять взятые на себя обязательства, когда они записывают их. Я (Стефани) обнаружила, что ведение списка даже с самыми мелкими задачами, например, выбрасывание мусора, подталкивает меня делать то, что мне нужно.К концу дня я чувствую себя выполненным, потому что понимаю, что все эти мелочи собраны в продуктивный день.

Еще одна техника обучения, которую я определенно рекомендую, - это техника помидора. Это работает так: вы выполняете 25-минутный цикл непрерывной работы, за которым следует короткий 5-минутный перерыв, а затем снова возвращаетесь к работе. Использование техники Помидора помогло мне понять, сколь многого я могу достичь за короткое время, если я буду полностью сосредоточен.Есть много приложений-таймеров Pomodoro, таких как Focus City, Focus Keeper и Emphasis, но мне больше всего нравится Flora. С Flora растение будет расти каждые 25 минут, когда вы остаетесь сосредоточенными.

Тем, кто пытается продуктивно работать в одиночку, я предлагаю посмотреть видео «Учись со мной» на YouTube. Их эстетические видео состоят из того, как они работают и продуктивны, что мотивирует меня, потому что заставляет меня чувствовать, что я много работаю с кем-то другим. На YouTube есть широкий выбор этих видео «Учитесь со мной», так что вы можете выбрать все, что вам больше нравится: будь то видео со звуками карандаша ASMR, фоновым шумом в кафе или даже потоковой передачей в реальном времени.

Будьте добры к себе!

Наконец, мы должны быть добры к себе. Как говорится в каждом письме и заголовке: мы живем в беспрецедентные времена. Легко запутаться из-за крайних сроков выполнения заданий и писем с отказами, но в конечном итоге мы все должны найти время, чтобы оглянуться назад и посмотреть, сколько мы уже достигли. Вам не обязательно быть продуктивным 24/7. Если вы устали, вздремните и отдохните. Не будьте так строги к себе, если не можете отметить все, что вам нужно.Вы уже стараетесь изо всех сил, и этого более чем достаточно.

Если вам когда-нибудь понадобится дополнительная помощь, у Imperial есть множество услуг, на которые вам стоит обратить внимание. Служба консультирования студентов и психического здоровья проводит предстоящие семинары по таким темам, как хороший сон, прокрастинация и управление стрессом, которые можно найти здесь. Команда также публикует еженедельные видеоролики и ресурсы в серии Kind Mind, в которых основное внимание уделяется таким важным вопросам, как преодоление карантина, преодоление стресса и беспокойства и повышение устойчивости; все они доступны здесь.. Кроме того, если вы чувствуете, что вам нужен кто-то, с кем можно поговорить, Imperial предлагает консультационную поддержку. , о котором вы можете договориться по этой ссылке.

Спасибо за внимание, мы надеемся, что эти советы помогут вам учиться и обрести счастье в эти непредсказуемые времена.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *