Юлия баринова: Баринова Юлия Олеговна биография и пресс-портрет

Маленький милый зайчик амигуруми бесплатный выкройка

Всем привет, ребята. Добро пожаловать на мой блог. Сегодня я поделюсь двумя очень милыми бесплатными выкройками амигуруми.
Первый из них — милый зайчик длиной 17 см. Имеет довольно простую модель. Большое спасибо @ yulya_barinova, которая подготовила этот узор амигуруми.Она действительно подготовила пример, который под силу каждому. Найти такие примеры немного сложно.
Иногда напоминаю друзьям, хочу еще раз написать. Пряжа, которую вы используете при изготовлении амигуруми, действительно важна. Если вы не используете качественную нить, амигуруми будут некрасивыми, а цвет очень быстро потускнеет. Когда вы моете его, когда он загрязняется, он полностью разрушается.
Никогда не бывает так, как раньше. Для более длительного использования используйте хорошую нить. Если вы приедете в Amigurumiye, вы можете найти подробности в разделе образцов.Буду рад, если товарищи-друзья поделятся со мной картиной амигуруми.
Замечательный малыш Амигуруми — заяц в сарафане от Юлии Бариновой. Для изготовления кролика автор использовал крючок 2,0 мм и пряжу YarnArt Jeans. Также вам понадобятся черные бусинки для глаз, пластиковый носик и наполнитель. Сарафан не снимается: юбка привязывается к телу, а кокетка — к юбке. Высота готовой игрушки около 17 см.

Замечательный малыш Амигуруми — заяц в сарафане от Юлии Бариновой.Для изготовления кролика автор использовал крючок 2,0 мм и пряжу YarnArt Jeans. Также вам понадобятся черные бусинки для глаз, пластиковый носик и наполнитель. Сарафан не снимается: юбка привязывается к телу, а кокетка — к юбке. Высота готовой игрушки около 17 см.

Сокращения
sc: одиночное вязание крючком
inc: увеличение
dec: уменьшение
tr: тройное вязание крючком / тройное вязание крючком
st: стежок
dc: двойное вязание крючком
hdc: половинное двойное вязание крючком
sl-st: Slip Stitch
ch : Цепь
. .in: увеличивайте количество стежков до числа, указанного перед аббревиатурой «inc» (exp; 3inc, 4inc ..).
FLO: вязать только в передние петли
BLO: вязать крючком только в изнаночные петли
BL: Bobble Stitch — сделать 5dc все той же петлей, а затем накинуть и протянуть все петли на крючке (исходная петля + 1 петля для каждый частично завершен dc).

Голова
1р — 6 сбн в MR
2р — 6 сбн (12)
3р — (1 сбн, пр) × 6 раз (18)
4р — (2 сбн, пр) × 6 раз 24)
5р — (3 сбн, пр) × 6 раз (30)
6р — (4 сбн, пр) × 6 раз (36)
7р — (5 сбн, пр) × 6 раз (42)
8р — (6 сбн, пр) × 6 раз (48)
9-15п — 48 сбн (7 рядов)
16п — (6 сбн, уб) × 6 раз (42)
17п — (5 сбн, уб) × 6 раз (36 )
18п — (4 сбн, уб) × 6 раз (30)
19п — (3 сбн, уб) × 6 раз (24)
20п — (2 сбн, уб) × 6 раз (18)
21п — 18 sc
Оставляем нить для пришивания.

Ушки
1п — 6 сбн
2п — 6 пр (12)
3п — (1 сбн, пр) × 6 раз (18)
4п-17п — 18 сбн (14 рядов)
18п — (2 сбн , уб) × 4 раза, 2 сбн (14)
19п — 14 сбн
20п — (1 сбн, уб) × 4 раза, 2 сбн (10)
21-24п — 10 сбн (4 ряд)

Руки
1п — 4 сбн в MR
2п — (1 сбн, пр) × 2 раза (6)
3-14п — 6 сбн (12 рядов)

Зайчик на фото ниже также связан крючком из джинсов YarnArt, только он был застегнут обычной липучкой для одежды.

Ножки-тело
1п — 4 сбн в MR
2п — 4 пр (8)
3-11п — 8 сбн (9 рядов)
Обрезать нить на одной ноге, продолжить вязание на другой.
2 ч, соединить ножки.
12р — (пр, 6 сбн, пр) — на одной ножке, 2 сбн по цепочке из вп, (пр, 6 сбн, пр) — на другой ножке, 2 сбн по цепочке из вп
13п — 24 сбн
14р — 9 сбн, 4 пр, 11 сбн (28)
15п — 28 сбн
16п — 5 сбн, пр, 5 сбн, 4 пр, 6 сбн, пр, 6 сбн (34)
17-21п — 34 сбн ( 5 ряд)
22п — (9 сбн, уб) × 3 раза, 1 сбн (31)
23п — 31 сбн
24п — (8 сбн, уб) × 3 раза, 1 сбн (28)
25п — 28 сбн
26п — (7 сбн, уб) × 3 раза, 1 сбн (25)
27п — 25 сбн
28п — (6 сбн, уб) × 3 раза, 1 сбн (22)
29п — 22 сбн
30п — (5 сбн, уб) × 3 раза, 1 сбн (19)
31п — связать руки (19)
32п — 19 сбн

Хвост
1п — 6 сбн в MR
2п — 6 сбн (12)
3-4п — 12 сбн (2 ряд)
5п — 6 уб (6)

Сарафан
По талии вяжем цепочку из сбн.
— прибавка из пп в каждый столбик
— сбн в каждый столбик — 2 ряда
кокетка вперед:
9 сбн — 6 рядов в поворотные ряды барашек из гл.

Наш малыш готов!

7 новых удивительных идей и изображений для вязания крючком амигуруми

В принципе, вы должны уметь делать частые спицы при вязании крючком.После того, как вы выучите это, вы начнете вязать в соответствии с приведенными рецептами и придадите игрушке форму, увеличивая или уменьшая петли там, где это необходимо. Вы можете найти видео и аннотированные рецепты в Интернете. Если вы не умеете делать частые иглы, вам может помочь наше видео ниже.

Привет, ребята. Когда мы говорим «кролик амигуруми», я думаю, что теперь мы можем подумать о тебе. Делимся множеством бесплатных выкроек кроликов :). Сегодня я снова здесь с кроликом.
По сути, это будет второй кролик.Первый был чем-то вроде модели. На самом деле, если посмотреть на размеры, он на 2 см меньше амигуруми. Однако, поскольку у него другое строение тела, он выглядит очень маленьким, хотя и длинным.
Эти кролики немного пухленькие. Я думаю, что они нравятся детям постарше. Не забудьте сшить разные платья после выполнения амигуруми. Пусть ваш ребенок увидит эти амигуруми.
Он будет иметь другое игровое назначение. Мой совет — использовать материалы в выкройке. Сделайте это легко для всех вас.

Первый из них — очаровательный зайчик длиной 17см. Имеет довольно простую модель. Большое спасибо yulya_barinova, которая подготовила эту выкройку амигуруми. Она действительно подала пример, который может подать каждый. Такие примеры найти немного сложно.
Иногда я вспоминаю своих друзей, что хочу снова написать. Нить, которую вы используете при изготовлении амигуруми, очень важна.Если вы не используете качественную пряжу, ваши амигуруми будут некрасивыми, а цвет очень быстро потускнеет. Когда вы моете его, когда он загрязняется, он полностью разрушается.
Никогда не бывает так, как раньше. Для более длительного использования используйте пряжу хорошего качества. Если вы приедете в Amigurumiye, вы можете найти подробности в разделе образцов. Я был бы рад, что сопровождающие друзья поделились со мной картиной амигуруми.
Чудесный малыш Амигуруми — заяц в сарафане Юлии Бариновой. Чтобы сделать кролика, автор использовал 2.Крючок 0 мм и пряжа YarnArt Jeans. Вам также понадобятся бусинки для глаз, пластиковый носик и пломба. Солнечное платье не снимается: юбка привязывается к телу, а кокетка — к юбке. Высота готовой игрушки около 17 см.

Это животное особенно известно своим свободным сном в течение всего дня. Фактически, он не является предпочтительным в качестве амигуруми. Самая главная причина этого в том, что это неизвестное животное.Как естественная среда обитания, вы можете жить только на австралийском континенте. Хотя я не очень разбираюсь в этом, я думаю, что дело в эволюции.
Подобно кенгуру, они появились здесь миллионы лет назад. В любом случае, оставим научные вопросы нам, ученым :). Продолжаем говорить об амигуруми. Да, ребята, вязать амигуруми очень сложно. Но когда вы закончите, у вас будет очень красивый амигуруми.
Таким образом, найти выкройки бесплатно довольно сложно. Так что большое спасибо за #bumbee_crochet.Вы можете общаться с ней через Instagram. Она делится очень красивыми и бесплатными выкройками без амигуруми. Поделюсь материалами, необходимыми для завершения амигуруми в конце, надеюсь, вам понравилось.
Наконец, если вы закончите вязать амигуруми, поделитесь со мной своей фотографией. Я люблю всех вас.

Прежде всего, добро пожаловать в мой блог. Продолжаю делиться красивыми бесплатными выкройками амигуруми. Прежде всего, я хотел бы поблагодарить Дарию Байш за то, что поделилась сегодня. Вы можете связаться с ней по адресу «@dariya_baysh» в Instagram. Она очень талантливый дизайнер.
Амигуруми, которые она делает, очень милые, а еще он любит использовать мягкую пряжу. Если у вас есть такая предрасположенность, я предлагаю вам последовать за ней. У них могут быть большие акции, которые ускользнули от нашего внимания.
Мы уже много раз говорили о медведях. Медведи — очень знакомое животное. Это одно из первых животных, которых он знает, особенно после того, как наши дети начали узнавать животных. Особенно в телепрограммах или видео мы можем увидеть много симпатичных медведей.
Несмотря на то, что телевидение сейчас не так часто смотрят, на YouTube есть много видео. В детстве у меня был медвежонок-йог. Мне это очень понравилось. Конечно, персонажи уже не такие простые. Создаются персонажи, которые намного более реалистичны, реалистичны и привлекают детское воображение. Если мы перейдем к амигуруми, то он сделан из очень милой мягкой пряжи.

Привет, ребята. Добро пожаловать на мой блог. Сегодня я поделилась для вас двумя выкройками без амигуруми. Оба моих работодателя сегодня очень милые овцы. Я пишу этот блог в течение 14 дней и еще не поделился ни одним рисунком овец амигуруми.
На самом деле, есть небольшая безнадежность по поводу того, оставить ли мне блог. Прошло 14 дней с тех пор, как я начал писать, и пока меня никто не навещал :). Конечно, это шутка. Думаю, я тебя догоню, пока буду писать.
В любом случае, я больше не эгоистка. Как вы можете видеть на изображениях, сегодня я делюсь вторым бесплатным шаблоном амигуруми.Она очень красивая модель. Дизайн Ольги Лукошкиной. Большое спасибо. Потому что он бесплатно делится таким красивым узором.
Такие сообщения очень сложно найти. Я пытаюсь исправить тебя, насколько могу. Кстати, большинство выкроек на русском языке. Я перевел их с помощью Google Translate. Я был бы очень рад, если бы вы не посмотрели на мою вину в этом отношении.

Привет, ребята. Добро пожаловать на мой блог. В сегодняшней статье я поделюсь с вами двумя схемами без амигуруми. Людмила Орлова — создательница первой. Спасибо большое, она очень талантливый дизайнер.
Я поделюсь вашим профилем vk.com и instagram в этой теме. Дизайн качественный и отличный амигурумис. Предлагаю вам последовать за ней. Я думаю, что эта модель овцы амигуруми — моя первая овечка амигуруми. Так что я немного взволнован и не могу много чего написать.
На самом деле выглядит как простая модель. Но смотрится довольно мило за счет качества используемой пряжи и гармонии образца.Создание амигуруми похоже на рисование. Маленькие штрихи вызывают большие изменения.
Это может быть в хорошем направлении, в плохом. Дело в твоем художественном духе. Поэтому, делая эти амигуруми, не забывайте делать небольшие штрихи, которые выражают ваши собственные.
Это улучшит ваш дизайнерский дух. Если вы умеете вязать амигуруми, вы талантливый человек. Если мы сейчас перейдем к амигуруми, как у настоящей овцы, его тело и голова сотканы из мягкой нити. Получилось очень красивое изображение.

Я здесь, чтобы поделиться с вами вторым бесплатным рисунком амигуруми.Прежде всего, добро пожаловать в мой блог, ребята. Как поживаешь? Я собираюсь поделиться моделью амигуруми, которая вам сегодня не предпочтительнее. Однако эта модель сильно отличается от водопадов.
Он действительно на шаг впереди, особенно своим внешним видом. Когда все закончится, это выглядит довольно модно. Конечно, здесь важно и качество каната. Как вы видите на изображении, сегодня я поделюсь с вами модельной собакой амигуруми. Надеюсь, вам понравилось фото и вы скачали образец.
Собаки — это семейство многих видов.Они могут быть очень страшными, они очень милые. Конечно, мы любим симпатичных собак :). На самом деле собаки все красивы. Речь идет о том, кто вырастил этих собак. Комната будет похожа на воспитание вашей собаки.
Семьи с детьми обычно предпочитают более послушных собак. Эту замечательную чирлидершу рекомендую связать семьям, у которых нет дома собак :). Когда вы закончите, он будет размером около 30 см. Довольно большой амигуруми.
Мне особенно понравилось, что у него есть шапочка для сна. Конечно, глаза в спящем режиме.Будда делает персонажа очень милым. Думаю, его персонаж довольно реалистичен.

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie.Вам необходимо сбросить настройки браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie.Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с вашим системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Фамилия Баринова

Имя для Баринова

• Ирина Баринова 6
• Мила Баринова 4
• Мария Баринова 4
• Иришка Баринова 4
• Иринка Баринова 4
• Ира Баринова 4
• Инна Баринова 4
• Инна Баринова 4
4
• Гендрика Баринова 4
• Галина Баринова 4
• Елизавета Баринова 4
• Яна Баринова 3
• Виктория Баринова 3
• Оксана Баринова 3
• Ольга Баринова 3
• Наталья Баринова 3
• Оксана Баринова 3
• Мария Баринова 3
• Екатерина Баринова 3
• Злата Баринова 2
• Зина Баринова 2
• Жанна Баринова 2
• Юля Баринова 2
• Юлия Баринова 2
Баринова 2 Баринова 2
• Юлия Баринова 2
• Юлия Баринова 2
• Юлия 2
• Виктория Баринова 2
• Виктория Баринова 2 902 62
• Вика Баринова 2
• Вета Баринова 2
• Вероника Баринова 2
• Вера Баринова 2
• Венера Баринова 2
• Вела Баринова 2
• Варвара Баринова 2
• Валерия Баринова 2
• Валерия Баринова 2
• Валерия Баринова 2
• Ульяна Баринова 2
• Тина Баринова 2
• Татьяна Баринова 2
• Татьяна Баринова 2
• Татьяна Баринова 2
• Тата Баринова 2
• Танюшка Баринова 2 9026 Баринова 2 9026 Баринова 2
• Танюшка Баринова 2 9026 Баринова 2 9026 Баринова
• Светлана Баринова 2
• Света Баринова 2
• Софья Баринова 2
• Соня Баринова 2
• София Баринова 2
• Слава Баринова 2
• Серафима Баринова 2 9026 Саша Баринова 2 9026 Баринова 2
• Серафима Баринова 2 9026 Баринова 2
• Серафима Баринова 2 9026 Баринова
• Рита Баринова 2
• Полина Баринова 2
• О Ля Баринова 2
• Олеся Баринова 2
• Оленька Баринова 2
• Елена Баринова 2
• Нина Баринова 2
• Ники Баринова 2
• Ника Баринова 2
• Наталья Баринова 2
Наталья Баринова 2 Наталья Баринова 2 Наталья Баринова 2
• Наталья Баринова 2
• Наталья Баринова 2
• Наталья Баринова 2
• Наталья Баринова 2
• Натали Баринова 2
• Наталья Баринова 2
Ната Баринова 2
• Ния Баринова 2
Ната Баринова 2 Надюша Баринова 2
• Надя Баринова 2
• Надя Баринова 2
• Надежда Баринова 2
• Надежда Баринова 2
• Мирослава Баринова 2
• Милана Баринова 2
• Баринова 2
• Майя Баринова 2
• Майя Баринова 2
• Майя Маришка Баринова 2
• Марина Баринова 2
• Мари e Баринова 2
• Мария Баринова 2
• Марианна Баринова 2
• Марго Баринова 2
• Маргарита Баринова 2
• Людмила Баринова 2
• Любовь Баринова 2
Баринова Людмила Баринова 2
• Людмила Баринова 2 Людмила Баринова 2
• Лиза Баринова 2
• Людмила Баринова 2
• Лиза Баринова 2
• Лина Баринова 2
• Лиля Баринова 2
• Лилия Баринова 2
Лилия Баринова 2
Лилия Баринова 2
Лилия Баринова 2
Лилия Баринова Лидия Баринова 2
• Лидия Баринова 2
• Леся Баринова 2
• Лена Баринова 2
• Лариса Баринова 2
• Лара Баринова 2
• Лана Баринова 2
Ксюша Баринова 2 Ксюша Баринова 2 Ксюша Баринова 2 Ксения Баринова 2
• Ксения Баринова 2
• Ксения Баринова 2 902 62
• Кристиночка Баринова 2
• Кристинка Баринова 2
• Кристина Баринова 2
• Катя Баринова 2
• Катюша Баринова 2
• Катя Баринова 2
9026 Карина Баринова 2 9026 Баринова 2 9026 Ката Баринова 2 9026 Баринова 2 9026 Ката Баринова 2
• Калерия Баринова 2
• Юлиана Баринова 2
• Юлия Баринова 2
• Дженни Баринова 2
• Елена Баринова 2
• Яна Баринова 2
• Яна Баринова 2
• 2
• Ивета Баринова 2
• Ивета Баринова 2
• Ивета Баринова
• Ириша Баринова 2
• Ириночка Баринова 2
• Ирада Баринова 2
• Инночка Баринова 2
• Ингуна Баринова 2
• Инга Баринова 2
• Инес Баринова 2
Баринова 2 Баринова 2 Индира Баринова 2
• Гульмира Баринова 2
• Геляна Баринова 2
• Ганна Баринова 2
• Гала Баринова 2
• Евгения Баринова 2
• Евгения Баринова 2
• Евгения Баринова 2
• Ева Баринова 2
• Эрика Баринова 2
Эльвира Баринова 2
• Эльвира Баринова 2
Эльвира Баринова 2
• Эльвира Баринова 2
• Елена Баринова 2
• Екатерина Баринова 2
• Дина Баринова 2
• Диана Баринова 2
• Даша Баринова 2
• Дарья Баринова 2
• Дарья Баринова 2
Кристина Баринова 2 Кристина Баринова 2 Кристина Баринова 2
• Айдана Баринова 2
• Арина Баринова 2
• Анжелика Баринова 2
• Анжела Баринова 2
• Аня Баринова 2
• Анн Баринова 2
• Анна Баринова 2
• Ангелина Баринова 2
• Ангелина Баринова 2
• Анастасия Баринова 2
• Анастасия Баринова 2
• Анастасия Баринова 2
• Анастасия Баринова 2
• Ана Баринова 2
• Алена Баринова 2
• Алла Баринова 2
• Алиса Баринова 2
• Алина Баринова 2
• Александра Баринова 2
• Александра Баринова 2
• Александра Баринова 2
• Александра Баринова
• Александра Баринова 2
• Агата Баринова 2
• Жужана Баринова
• Зоя Баринова
• Зинаида Баринова
• Жанаргуль Баринова
• Зарина Баринова
• Zarida Баринова
• Занна Баринова
• Yulianochka Баринова
• Юлианна Баринова
• Юлиана Баринова
• Илья Баринова
• Ксина Баринова
• Владислава Баринова
• Влада Баринова
• Вита Баринова
• Виолетта Баринова
• Вики Баринова
• Вида Баринова
Баринова
• Виктория Баринова
• Вида Баринова
Баринова
• Вида Баринова
Баринова
• Баринова
• Василина Баринова
• Василина Баринова
• Валий Баринова
• Валюсык Баринова
• Валя Баринова
• Валерия Баринова
• Валерия Баринова
Улия Баринова 9026 Улья Баринова 9026 Улья Баринова 9026 Улья Баринова 9026
• Тетян Баринов
• Тая Баринов
• Татей Баринов
• Танюши Баринова
• Tanusha Баринова
• Танички Баринов
• Тана Баринов
• Таисии Баринова
• Swetlana Баринов
• Светочки Баринов
• Софии Баринов
• Дивана Баринов
• Снежаны Баринова
• Сильвия Баринова
• Сэнди Баринова
• Селена Баринова
• Сати Баринова
• Сарка Баринова
• Сара Баринова
• Санта Баринова
• Сания Баринова
• Руслана Баринова
• Римма Баринова
• Римма Баринова
• Регина Баринова
• Ранетта Баринова
• Раиса Баринова
• Раиса Баринова
• Поликсена Баринова
Поликсена Баринова 9026 Поликсена Баринова
• Поликсена Баринова
9026 Поликсена Баринова Баринова
• Oksanamoon Баринова
• Норы Баринов
• Ниночки Баринов
• Никола Баринов
• Никиту Баринов
• Неля Баринов
• Natulya Баринова
• Natehlla Баринова
• Nataliia Баринова
• Natacha Баринова
• Настюха Баринов
• Nastja Баринова
• Насти Баринова
• Настя Баринова
• Настасья Баринова
• Настасья Баринова
• Наска Баринова
• Нармина Баринова
• Наиля Баринова
• Надин Баринова 9026 2
• Надежда Баринова
• Муза Баринова
• Мулана Баринова
• Момо Баринова
• Млада Баринова
• Миша Баринова
• Милла Баринова
• Милена Баринова
Баринова Мила Баринова Баринова
• Мила Баринова
Мартина
• Margarett Баринова
• Марсела Баринова
• Маншук Баринова
• Мадина Баринова
• Lyusena Баринова
• Любаша Баринова
• Люба Баринова
• Люся Баринова
• Luiza Баринова
• Lubovi Баринова
• Любы Баринова
• Любовь Баринова
• Люда Баринова
• Лия Баринова
• Люсия Баринова
• Лисса Баринова
• Лили Баринова
• Лили Баринова
• Лилиана Баринова
• Лидия Баринова
• Лидия Баринова 9026 Лидия Баринова
• Лия Баринова
• Лейсан Баринова
• Лера Баринова
• Леона Баринова
• Ленисик Баринова
• Ленуська Баринова
• Ленусик Баринова
Ленка Баринова
• Барсениа
• Барсениа
• Барсениа
• Барсениа
• Барсениа
• Барсениа
• Барсениа
• Барсениа
• Барсениа 9026 Баринова
• Krisyina Баринова
• Kristyna Баринова
• Kristi Баринова
• Kris Баринова
• Kirochka Баринова
• Kira Баринова
• Ketti Баринова
• Катюшка Баринова
• Катюха Баринова
• Katrina Баринова
• Кэти Баринова
• Кати Баринова
• Катерина Баринова
• Кат Баринова
• Карка Баринова
• Каралина Баринова
• Камилла Баринова
• Джилия Баринова
• Юргита Баринова
• Юлия Баринова
• Jul Иджа Баринова
• Юлианна Баринова
• Джитка Баринова
• Екатерина Баринова
• Янни Баринова
• Жанна Баринова
• Джанай Баринова
• Яана Баринова
• Баринова
Баринова
• Ироида
• Есения Баринова
• Эмилия Баринова
• Елка Баринова
• Элизабет Баринова
• Эльга Баринова
• Елен Баринова
• Eketerina Баринова
• Ekaterinka Баринова
• Ehlya Баринова
• Ehlvira Баринова
• Dorosida Баринова
• Дора Баринова
• Доминик Баринова
• Доменика Баринова
• Динара Баринова
• Диля Баринова
• Дашенька Баринова
• Даша Баринова
• Дарья Баринова
• Дарина Баринова
• Д анка Баринова
• Дана Баринова
• Каролина Баринова
• Брабра Баринова
• Богдана Баринова
• Бета Баринова
• Беата Баринова
• Баян Баринова
Барин Баринова 9026 Барина 9026 Баринова 9026 Баринова 9026 Баринова 9026 Баринова 9026 Баринова 9026
• Ары Баринова
• Аришка Баринова
• Ариадна Баринова
• Анутка Баринова
• Антонина Баринова
• Антонида Баринова
• Аннель Баринова
Аннушка Баринова Аннушка Баринова Аннушка Баринова
• Аннушка Баринова
Аннушка Баринова Анфиса Баринова
• Анастейша Баринова
• Анастейша Баринова
• Анастасия Баринова
• Анастасик Баринова
• Анасташа Баринова
• Аленка Баринова
• Алсу Баринова
Алсу Баринова a Баринова
• Алёна Баринова
• Альфия Баринова
• Алекс Баринова
• Алекса Баринова
• Алевтина Баринова
• Алеся Баринова
• Алаа Баринова
• Айзада Баринова
Айзада Баринова 9026 Айзада Баринова 9026
• Аэлита Баринова
• Аастасия Баринова

Опечатки и опечатки

/ Даринова / Каринова / Заринова / Таринова / Наринова / Ларинова / Гаринова / Маринова / Паринова

Рисунок

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Курирование данных: Susana Ponte, Lara Carvalho Dr.

Методология: Susana Ponte

Расследование: Susana Ponte

Оригинальный черновик: Susana Ponte, Lara Carvalho Dr.

Обзор и редактирование: Susana Ponte, Antonio Jacinto Prof., Lara Carvalho Dr.

Визуализация данных: Susana Ponte

Куратор: Антонио Хасинто Проф. , Лара Карвалью д-р

Ресурсы: Антонио Хасинто Проф.

Администрация проекта: Антонио Хасинто Проф.

Финансирование: Антонио Хасинто Проф.

Концептуализация: Лара Карвалью доктор

Эпителии — важные ткани во всех многоклеточных организмах, которые создают барьер против внешней среды. Чтобы выполнять эту жизненно важную функцию, эпителиальные клетки должны быть плотно связаны друг с другом, в то же время они позволяют формировать ткани и клетки сложной формы. Окклюзионные соединения (OJs) превратились в привратников эпителия — они закрывают межклеточные пространства, но также обеспечивают избирательную проницаемость. Недавние исследования также предположили, что OJs регулируют морфогенез и полярность эпителия, но механизмы все еще плохо изучены. Здесь мы исследовали новые функции OJs, исследуя функцию Neurexin-IV (Nrx-IV), консервативного трансмембранного белка семейства Neurexin / Contactin, локализованного в OJs беспозвоночных, используя эпителий личинок Drosophila melanogaster в качестве модельной системы. Снижая экспрессию этого белка в определенной подгруппе эпителиальных клеток и контролируя время, мы показываем, что Nrx-IV необходим для правильной организации эпителиальной ткани и выживания. Это указывает на то, что OJs играют более важную роль в морфогенезе эпителия, чем предполагалось ранее.Поскольку Nrx-IV также присутствует в глиальных OJs беспозвоночных и в аксоглиальных соединениях позвоночных, эта работа не только расширяет наши знания об эпителии, но также может иметь значение в биологии нервной системы.

Рис. 1. Nrx-IV необходим для организации эпителия и выживания в имагинальном диске крыла дрозофилы. (AO) Конфокальные изображения (AE) контроля (tubPGal80ts / +; hh-Gal4, UAS-GFP / UAS-люцифераза, Luc) и (FO) нокдауна Nrx-IV (tubPGal80ts / +; hh-Gal4, UAS-GFP / Nrx-IV RNAi) крыловых дисков (две разные линии RNAi; FJ, UAS-Nrx-IV-dsRNA-HMS00419; KO и UAS-Nrx-IV-dsRNA-HMS01991) после 72 часов экспрессии RNAi.(A-O) Изображения представляют собой максимальную Z-проекцию. (A’-O ’) XZ-разрезы соответствующей максимальной проекции Z на уровне подкрылка. (A, A ’, F, F’, K, K ’) Окрашивание F-актина (фаллоидин). (B, B ’, G, G’, L, L ’) Окрашивание GFP, маркирующее задний отдел крылового диска и область экспрессии РНКи (C, C ’, H, H’, M, M ’) Окрашивание ядер (DAPI). (D, D ’, I, I’, N, N ’) Окрашивание активированной каспазой-3. (E, E ’, J, J’, O, O ’) Объединенное изображение окрашивания DAPI (синий), GFP (зеленый) и каспазы-3 (красный). Нокдаун крыловых дисков Nrx-IV имеет аномальную форму (сравните A с F, K; мешок крыльев обведен желтыми пунктирными линиями), а передне-задняя граничная область деформирована по сравнению с контрольной группой (желтые стрелки на F, K).В отличие от контроля и переднего компартмента, F-актин накапливается базолатерально (белая стрелка в F ’, K’) в дисках крыльев Nrx-IV RNAi. Мы также наблюдали каспазу-3-положительные клетки, отслаивающиеся от эпителия в дисках крыльев Nrx-IV РНКи (белые стрелки в H’-J ’, M’-O’). Белые пунктирные линии обозначают передне-заднюю границу. Переднее — слева, заднее — справа. Апикальный приподнят, базальный опущен. Шкала шкалы = 20 мкм.

OJs необходимы многоклеточным организмам для регуляции барьерной функции эпителия.У позвоночных эту роль выполняют Tight Junctions (TJs), тогда как у беспозвоночных это делают через Septate Junctions (SJs) ^{[1] [2]} . TJ и SJ имеют общие ключевые компоненты, такие как белки семейства Claudin. SJs также содержат консервативные молекулы, присутствующие в паранодальных соединениях позвоночных, которые связывают миелинизированные глиальные клетки с аксонами ^[3] .

Исследования на плодовой мушке Drosophila melanogaster (далее называемой Drosophila) позволили открыть более 20 консервативных белков, присутствующих в SJ, которые, по-видимому, образуют стабильный молекулярный комплекс ^{[4] [5]} .Основные компоненты SJ включают как трансмембранные, такие как Claudins, нейрексин Caspr-домена (Nrx-IV), Neuroglian и Na ⁺ / K ⁺ -ATPase, так и цитоплазматические белки, такие как Coracle и Varicose.

Хотя парацеллюлярный барьер является наиболее изученной функцией SJs, недавние исследования показывают, что они также играют роль в морфогенезе эпителия независимо от их барьерной функции ^{[6] [7] [8]} . Напр., Нарушение функции SJ во время эмбрионального развития ведет к дефектам различных процессов, таких как размер эпителиальной трубки, отложение внеклеточного матрикса и клеточные перестройки.Тем не менее, вовлеченные молекулярные механизмы до сих пор неизвестны. Более того, большая часть знаний об этих соединениях получена в результате исследований, проведенных на эмбрионе, и, следовательно, их вклад в биологию постэмбрионального эпителия остается в значительной степени без внимания. Это побудило нас исследовать роль SJs в эпителии имагинального диска крыла личинок дрозофилы.

Основная цель этой работы состояла в изучении новых функций SJs в эпителиальном морфогенезе в постэмбриональной ткани.

Чтобы понять функцию SJ в эпителии имагинального диска крыла Drosophila, мы сначала рассмотрели субклеточную локализацию компонента SJ Nrx-IV с использованием линии ловушки белка с GFP, которая, как было ранее показано, отражает эндогенную локализацию Nrx-IV. ^{[9] [5]} . SJs обычно локализуются в апикальной области клетки ниже Adherens Junctions (AJs) и ассоциированного с ним кортикального актинового пояса ^[1] . Поэтому мы сравнили локализацию Nrx-IV с F-актином в XZ-срезах.Как и ожидалось, Nrx-IV локализуется апикально, чуть ниже F-actin (Fig. S1A-C).

Чтобы исследовать функцию Nrx-IV, мы сбили выражение в имагинальном диске крыла. Для этого мы использовали систему Gal4 / UAS для экспрессии двухцепочечной РНК (дцРНК) против Nrx-IV, особенно в заднем отделе крылового диска, с использованием драйвера hedgehog-Gal4 (hh-Gal4) ^{[10] [11 ]} . При таком подходе передний отсек того же крылового диска служит внутренним контролем.

SJ образуют стабильный белковый комплекс, в котором нокдаун одного компонента приводит к неправильной локализации других компонентов, что ставит под угрозу функцию SJ ^{[4] [5]} . Таким образом, чтобы подтвердить Nrx-IV РНКи, мы проверили, влияет ли ее экспрессия на локализацию другого основного компонента SJ, Coracle, который, как известно, связывает Nrx-IV ^[12] (рис. S1D-L ’). Как и ожидалось, в дисках контрольных крыльев Coracle локализуется в основном в апикальной области клеток (Fig. S1D ’).Мы уничтожили Nrx-IV, используя две разные линии РНКи. В обоих случаях мы наблюдали снижение уровней Coracle в заднем отделе, где экспрессировалась Nrx-IV RNAi (Fig. S1G, J). Кроме того, локализация Coracle была нарушена: он был локализован равномерно вдоль боковой мембраны, а не в основном апикально, как в контроле (более очевидно с линией Nrx-IV RNAi dsRNA-HMS00419, рис. S1G ’, белая стрелка).

Чтобы оценить влияние нокдауна Nrx-IV на целостность и полярность эпителия, мы исследовали локализацию F-актина и E-кадгерина белка AJ на дисках неподвижных крыльев.Локализация E-cadherin, по-видимому, не затрагивается при нокдауне Nrx-IV: как в контрольных, так и в нокдаун Nrx-IV крыльевых дисках, E-cadherin в основном локализуется в самой апикальной области клеток (Fig. S2). Окрашивание F-актином показало, что, в отличие от контрольных крыльевых дисков (рис. 1A, A ‘), задняя область нокдаунных крыльевых дисков Nrx-IV имела аномальную форму (рис. 1F, F’, K, K ‘, см. область подкрылка, пунктирная линия желтого цвета). Задний компартмент Nrx-IV RNAi обычно представлял собой углубление вблизи передне-задней границы (рис.1F ’, K’, желтые стрелки). Более того, в некоторых клетках, экспрессирующих РНКи, F-актин накапливался в большем количестве базолатеральных областей, тогда как в контрольных клетках F-актин локализовался в апикальной области (Рис. 1F ’, K’, белые стрелки). Эти данные указывают на то, что Nrx-IV необходим для организации эпителиального листа, но не для локализации AJ.

Глядя на локализацию ядерного маркера, мы заметили, что, в отличие от контроля, несколько клеток, экспрессирующих РНКи Nrx-IV, представили фрагментированные ядра и отслоились от эпителиального слоя (рис.1H ’, M’, фиг. S2F ’, белые стрелки), но, по-видимому, не экспрессировал E-кадгерин (фиг. S2D’-F’, белые стрелки). Это предполагает, что отсутствие Nrx-IV может вызывать гибель клеток. Чтобы исследовать это, мы окрашивали контрольные и крылатые диски Nrx-IV РНКи для маркера апоптоза, активированного каспазой-3 ^[13] . Мы обнаружили, что действительно расслаивающиеся клетки, экспрессирующие Nrx-IV РНКи, положительно окрашиваются на активированную каспазу-3 (рис. 1I-I ’, J-J’, N-N ’, O-O’, белые стрелки). Это указывает на то, что нокдаун Nrx-IV вызывает гибель клеток.В соответствии с этим задний компартмент в дисках крыльев Nrx-IV RNAi, по-видимому, имеет меньше клеток, чем контроль (сравните Рис. 1A’-E ’с F’-J’).

В целом, наши результаты подтверждают, что SJ, и в особенности Nrx-IV, важны для поддержания эпителиальной организации и выживания в крыловых имагинальных дисках. Недавние исследования уже предположили, что компоненты SJ могут играть важную роль в морфогенезе эпителия независимо от их барьерной функции. А именно, было показано, что Nrx-IV вместе с другими молекулами SJ (Юрта, Коракл и Na ⁺ / K ⁺ -АТФаза) действует, чтобы поддерживать апикально-базальную полярность на ранних стадиях эмбриона, до Барьерная функция SJ устанавливается, но не во время позднего эмбриогенеза, когда барьерная функция SJ полностью устанавливается ^[14] .Было также показано, что другие белки SJ регулируют форму клеток и перестройки во время образования слюнных желез и закрытия ран ^{[15] [8]} . Наконец, SJ регулируют механические свойства эпидермиса эмбриона ^[8] . С другой стороны, мы показываем, что потеря функции Nrx-IV, по-видимому, не влияет на локализацию AJ, что также подтверждается предыдущими исследованиями ^{[16] [17] [18] [8]} . Следовательно, будущие эксперименты должны в дальнейшем выяснить, как на апикально-базальную полярность влияют Nrx-IV или др. Компоненты SJs в имагинальном диске крыльев.

Что касается постэмбрионального эпителия, наше исследование — первое, показывающее, что основной компонент SJ может влиять на актиновый цитоскелет. В то время как у позвоночных связь между OJs и F-actin была четко продемонстрирована, у беспозвоночных эта связь все еще плохо изучена ^{[19] [20] [8]} . Таким образом, необходимы дополнительные исследования, чтобы понять молекулярные механизмы, которые регулируют взаимодействия между OJs и цитоскелетом.

Фенотип клеточной смерти, который мы наблюдали при нокдауне Nrx-IV, также указывает на роль SJs в выживании клеток и целостности ткани.Предыдущие исследования показали, что клоны мутантных клеток по нескольким компонентам SJ не доживают до взрослых стадий ^{[17] [18]} . Хотя гибель клеток в этих исследованиях не оценивалась, их результаты подтверждают гипотезу о том, что SJs необходимы для выживания клеток. Интересно, что в одном исследовании также сообщается, что трансмембранный белок SJ Neuroglian стабилизирует целостность эпителия фолликулярного эпителия яичников и что его потеря функции ведет к аномальной полярности клеток и расслоению, хотя молекулярные механизмы все еще не полностью изучены ^[21] .

Этот отчет показывает, что компонент ядра SJ Nrx-IV необходим для организации и целостности эпителиальной ткани в имагинальном диске крыльев дрозофилы. В частности, потеря функции Nrx-IV вызывает дефекты в локализации F-актина и гибель клеток.

Функциональный анализ в этой работе был выполнен путем сбивания функции Nrx-IV с помощью RNAi, что, вероятно, вызывает только частичную потерю функции. Хотя мы использовали две разные трансгенные линии РНКи без прогнозируемых отклонений от мишени, необходимо провести больше экспериментов с использованием нулевого мутанта.

В будущих исследованиях было бы важно определить, влияет ли нокдаун Nrx-IV также на локализацию других компонентов полярности эпителия и как он вызывает апоптоз. Кроме того, функциональный анализ других компонентов SJ должен сказать нам, являются ли фенотипы, наблюдаемые в этом исследовании, специфичными для Nrx-IV или они являются общей характеристикой белков SJ. Наконец, поскольку потеря функции SJ влияет на целостность эпителия диска крыльев (это исследование) и механические свойства эмбрионального эпидермиса ^[8] , было бы интересно выяснить, влияет ли потеря функции SJ на реакцию эпителия диска крыла к механическому воздействию.

Экспериментальный дизайн и ложи

Все использованные штаммы были приобретены в Bloomington Stock Center (Индиана, США).

Nrx-IV оценивалась с использованием линии ловушек для белков GFP, разработанной FlyTrap Project (CA06597). Эта линия состоит из GFP-меченного белка, экспрессируемого из его эндогенного локуса, что позволяет визуализировать субклеточную локализацию белка ^[9] . Ранее было показано, что линия, использованная в этой работе, отражает локализацию эндогенного Nrx-IV ^[5] .

NrxIV выполняли путем экспрессии двух разных линий РНКи (UAS-Nrx-IV-dsRNA-HMS00419 и UAS-Nrx-IV-dsRNA-HMS01991, TRiP в Гарвардской медицинской школе) тканеспецифическим образом, используя преимущества Система Gal4 / UAS ^{[23] [24]} . Мы использовали драйвер hedgehog-Gal4 (hh-Gal4), который управляет экспрессией генов в заднем отделе имагинального диска крыла личинки ^[11] . Мы также экспрессировали UAS-GFP, чтобы визуализировать область, в которой экспрессируется РНКи.UAS-люциферазу (контроль для линий Valium 20 RNAi, TRiP в Гарвардской медицинской школе) или мух W ¹¹¹⁸ , не экспрессирующих RNAi, использовали в качестве контроля. Чтобы ограничить нокдаун Nrx-IV личиночными стадиями, мы временно ограничили экспрессию РНКи, используя технику TARGET, в которой экспрессия Gal4 ингибируется термочувствительной версией Gal80 (Gal80ts) при ограничительных температурах (18 ° C), но активна при допустимых температурах ( 29ºC) ^[25] .

Яйца собирали в течение 12–24 часов, а эмбрионы и ранние личинки содержали при ограничительной температуре (18 ° C) в течение 3-5 дней.Чтобы активировать экспрессию Nrx-IV РНКи, личинок инкубировали при 29ºC в течение 48–72 часов, а личинок среднего третьего возраста (Mid-L3, блуждающая стадия) собирали для проведения иммунофлуоресцентного окрашивания.

Протокол иммунофлуоресценции

личинок Mid-L3 вскрывали, как описано ^[26] . Разделенные личинки фиксировали в течение 20 минут в 4% параформальдегиде (Sigma-Aldrich) в фосфатно-солевом буфере (PBS) 1 × при комнатной температуре (RT) и промывали 5 × PBST [PBS 1 × + 0,1% Triton-X , (Acros Organics)].Личинок инкубировали в блокирующем растворе [0,5% бычьего сывороточного альбумина (Sigma-Aldrich) в PBST] в течение минимум 45 минут с последующей инкубацией в течение ночи при 4ºC с первичными антителами (мышиные анти-GFP, 1: 500, Roche ; кроличьи анти-GFP, 1: 2000, Invitrogen; крысиные анти-Е-кадгерин, 1:20, DSHB; мышиные анти-Coracle C-концевые области, 1:50, DSHB; кроличьи антитела против расщепленной каспазы-3 (Asp175) , 1: 150, Cell Signaling) разводят в блокирующем растворе. Личинок промывали 5 раз блокирующим раствором и инкубировали со вторичными антителами (Alexa Fluor ^® 647 Donkey Anti-Rabbit, 1: 250, Jackson ImmunoResearch; Alexa Fluor ^® 488 Goat Anti-Mouse, Cy5 ^® Goat Anti-Rabbit. Rat; оба 1: 250, Life Technologies) в течение 2 ч при комнатной температуре.Alexa Fluor ^® 568 Фаллоидин (1: 100, Life Technologies) добавляли к инкубации вторичных антител для метки F-актина. Раствор DAPI (4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндол, 1: 500, Sigma-Aldrich) добавляли в последние 10 мин инкубации вторичных антител для мечения ядер. Личинок промывали 5 раз PBST перед добавлением среды, препятствующей выцветанию [2% DABCO (1,4-диазабицикло [2.2.2] октан, Sigma-Aldrich) + PBS 1 × (1: 4) + глицерин]. Окрашенные диски крыльев отделяли от оставшихся тканей личинок и помещали в каплю монтажной среды между двумя покровными стеклами размером 24 × 60 мм.Покровные стекла были разделены перемычкой высотой в одно покровное стекло, чтобы предотвратить повреждение тканей, и покрыты лаком для ногтей.

Визуализация и анализ изображений

Визуализация диска крыльев выполнялась на конфокальном микроскопе LSM 710 (Carl Zeiss) с использованием водяного объектива 40X. Изображения были проанализированы с использованием Fiji ^[27] . Канал Caspase-3 был обработан для коррекции шума с использованием функции удаления выбросов (радиус 5 пикселей, порог 10) с использованием Fiji. Рисунки выполнены в Adobe Photoshop и Adobe Illustrator.

Мы благодарны Т. Перейре за неоценимую поддержку при построении изображений и анализе данных; C. Mendes за совместное использование антитела к каспазе-3; бывших и нынешних членов лаборатории восстановления тканей и воспаления за полезные обсуждения и техническую помощь; оборудование для микроскопии и мух в CEDOC; Фондовый центр дрозофил Блумингтона (NIH P40OD018537), TRiP в Гарвардской медицинской школе (NIH / NIGMS R01-GM084947), проект FlyTrap и Киотский фондовый центр (DGRC) для предоставления линий дрозофил.

VBCF — История изменений