Елена немцева: Главная — Студия Елены Немцевой

Автор: | 27.01.2019

Содержание

Елена Немцева, — Учёба.ру

Я б в нефтяники пошел!

Пройди тест, узнай свою будущую профессию и как её получить.

Химия и биотехнологии в РТУ МИРЭА

120 лет опыта подготовки

Сервис онлайн-консультаций

Выбери профессию, о которой потом не пожалеешь

Международный колледж искусств и коммуникаций

МКИК — современный колледж

Английский язык

Совместно с экспертами Wall Street English мы решили рассказать об английском языке так, чтобы его захотелось выучить.

15 правил безопасного поведения в интернете

Простые, но важные правила безопасного поведения в Сети.

Олимпиады для школьников

Перечень, календарь, уровни, льготы.

Первый экономический

Рассказываем о том, чем живёт и как устроен РЭУ имени Г.В. Плеханова.

Билет в Голландию

Участвуй в конкурсе и выиграй поездку в Голландию на обучение в одной из летних школ Университета Радбауд.

Цифровые герои

Они создают интернет-сервисы, социальные сети, игры и приложения, которыми ежедневно пользуются миллионы людей во всём мире.

Работа будущего

Как новые технологии, научные открытия и инновации изменят ландшафт на рынке труда в ближайшие 20-30 лет

Профессии мечты

Совместно с центром онлайн-обучения Фоксфорд мы решили узнать у школьников, кем они мечтают стать и куда планируют поступать.

Экономическое образование

О том, что собой представляет современная экономика, и какие карьерные перспективы открываются перед будущими экономистами.

Гуманитарная сфера

Разговариваем с экспертами о важности гуманитарного образования и областях его применения на практике.

Молодые инженеры

Инженерные специальности становятся всё более востребованными и перспективными.

Табель о рангах

Что такое гражданская служба, кто такие госслужащие и какое образование является хорошим стартом для будущих чиновников.

Карьера в нефтехимии

Нефтехимия — это инновации, реальное производство продукции, которая есть в каждом доме.

Немцева Елена Владимировна

Немцева Елена Владимировна

Доцент , МС по многоборью

 Биография и награды

Родилась 13 июня 1968 года в городе Ростове-на-Дону.

В 1989 году окончила Ростовский государственный педагогический университет по специальности "Учитель физической культуры".

С 1995 года по настоящее время является сотрудником Донского государственного технического университета в качестве доцента.

Мастер спорта СССР

Является заместителем декана по физической культуре и спорту на факультете «Машиностроительные технологии и оборудование», контролирует учебный процесс по физической культуре, занимается организацией спортивно массовых мероприятий, комплектованием сборных команд факультета для участия в межфакультетских соревнованиях.

Является заместителем заведующего по кафедре «Физвоспитание», ведет работу в  направлении  деятельности кафедры по организации учебного процесса, контроля за успеваемостью, распределением и выполнением учебной нагрузки преподавателями и кафедрой.

Принимает участие в судействе вузовских, городских, областных и всероссийских соревнованиях.  

Образование

1989

Ростовский государственный педагогический университет, Учитель физической культуры

Преподаваемые дисциплины

Физическая культура

Элективные курсы по физической культуре

Профессиональный опыт

1988-1989

 – инструктор методист по военно-прикладному многоборью областного спортивно стрелкового клуба ДОСААФ

1989 - 1995

 – учитель физической культуры средней школы  № 73

1995 - н. в.

– преподаватель кафедры; старший преподаватель; доцент кафедры «Физвоспитание» Донского Государственного Технического Университета.

Стаж работы

32

Стаж работы по специальности

25

Научные интересы

Анализ и обобщение организационно-методического, педагогического и тренерского опыта в нетрадиционных современных видах физических упражнений и спорта; профессионально-ориентированное физическое  воспитание студентов в высшем образовании

Повышение квалификации и (или) профессиональная подготовка

2010 г. – «Компетентностно-ориентированный подход к формированию общих образовательных программ и оценке результатов обучения»

2016г. ФГБОУ ВО «Северо-осетинский государственный университет им. Хетагурова» по программе: «Психолого-педагогические аспекты в образовательном процессе вуза»

2016 г. ЮФУ, Академия ФКиС по программе: «Судейство соревнований комплекса ГТО»

2018 «Оказание первой медицинской помощи в образовательном процессе по физическому воспитанию», ДГТУ, г. Таганрог 54 часа

2018 «Сопровождение образовательного процесса лиц с ограниченными возможностями здоровья». ДГТУ, г. Таганрог 54 часа

2019 «Электронная информационно образовательная среда вуза» ДГТУ, г. Ростов-на-Дону, 36 часов

Публикации

Немцева Е. В., Рыжкин Н.В., Коробов И.А. Рациональное питание студентов как основа сбережения здоровья.

2-я Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием, «Физическая культура, спорт и здоровье в современном обществе» посвящённой памяти заслуженного работника физической культуры Российской Федерации, кавалера серебряного ордена Международного олимпийского комитета Б.А. Кабаргина. 16 марта 2019 г., ДГТУ

Рыжкин Н.В., Немцева Е.В., Бровашова О.Ю., Использование психологических практик в тренировочном процессе.

ГНИИ «Нацразвитие», при поддержке УМО вузов России, шифр конференции PSM 283, 27 февраля 2019 года.

Нещерет Н. Н., Немцева Е.В., Тумасян Т.И., История появления и развития киберспорта.

Международная научно-практическая конференция «Международные практики развития спорта, физической культуры и туризма в контексте современных социально- политических вызовов», 18 февраля 2019 г., г.Красноярск

Немцев А.В., Немцева Е.В., «Основополагающие понятия здорового образа жизни»Научно-практическая конференция молодых учёных,

Физическая культура, спорт и здоровье в современном обществе, 15 марта 2018 г. ДГТУ г.Ростов-на-Дону

Немцева Е.В., Бровашова О.Ю. «Использование психологических практик в тренировочном процессе»,

Сборник публикаций мультидисциплинарного научного журнала «АРХИВАРИУС» по материалам XXIX международной научно-практической конференции: «Наука в современном мире» г.

Киева: сборник со статьями (уровень стандарта, академический уровень).-К.: мультидисциплинарный научный журнал «АРХИВАРИУС», 2018.-80с.

Немцева Е.В., Бровашова О.Ю. «Использование психолого-педагогических воздействий физической культуры в процессе становления студента, как личности, профессионала»,

Развитие современного социально-гуманитарного знания: сборник научных трудов по материалам Международной научно-практической конференции 28 февраля 2018 г.: в 4 части/ Под общ. Редакцией Е.П. Ткачёвой.-Белгород: ООО Агенство перспективных научных исследований (АПНИ), 2018.-Часть I.-156с

Немцева Е.В., Немцев А.В. «Влияние двигательной активности на организм человека»,

Современная образовательная среда: новые методы, направления и пути развития: сборник научных трудов по материалам VI Международного педагогического форума молодых учёных, 30 января 2018г.

., Санкт-Петербург: Профессиональная наука, 2018.-64

Елена Немцева (Калининград) — тренер — отзывы, контакты, расписание тренингов — Самопознание.ру

Сертифицированный инструктор йоги, выпускник Калининградского института йоги, автор программы "Восстанавливающая Космо-йога", имею высшее педагогическое образование, более 15 лет занимаюсь йогой и эзотерическими практиками, прошла инициацию 1 ступени Рейки, провожу занятия Хатха-йоги для любого возраста и уровня подготовки.

Скопировано с сайта «Самопознание .ру»

Расскажите друзьям

Фотоальбомы

Йога

Елена Немцева — оценки и отзывы

свернуть ↑
Насколько тренер профессионален в данной области
Насколько интересен процесс обучения
Насколько хорошо было организовано мероприятие
Соответствие программы мероприятия заявленным целям
Практическая ценность полученных знаний
Буду ли я рекомендовать посетить данное мероприятие
Итоговая оценка
Итоговая оценка

Яндекс Дзен | Открывайте новое каждый день

Яндекс Дзен | Открывайте новое каждый день

Яндекс. Дзен – это платформа, которая подбирает контент специально для вас. В Дзене есть статьи и видео на разные темы от блогеров и медиа.

Ваш личный Дзен

Дзен понимает ваши интересы и собирает ленту для вас. Он анализирует действия: что вы смотрите, кому ставите лайки, на кого подписываетесь, а после – рекомендует вам и уже любимые источники, и ещё неизвестные, но интересные публикации.

Вы смотрите и ставите лайки

шаг 1

Алгоритм отслеживает это и подбирает контент

шаг 2

Вы видите интересные именно вам материалы

шаг 3

Интересные истории

В Дзене есть популярные медиа и талантливые блогеры. Ежедневно они создают тысячи историй на сотни разных тем. И каждый находит в Дзене что-нибудь для себя.

Примеры публикаций

В Дзене действительно много уникальных статей и видео. Вот несколько примеров популярного сейчас контента.

Дзен — простой, современный и удобный

Посмотрите на главные возможности сервиса и начните пользоваться всеми преимуществами Дзена.

Читайте о своих интересах.

Алгоритмы Дзена понимают, что вам нравится, и стараются показывать только то, что будет действительно интересно. Если источник вам не подходит - его можно исключить.

1/4

Тематические ленты.

С общей ленты со всеми статьями легко переключайтесь на тематические: кино, еда, политика, знаменитости.

2/4

Разнообразные форматы.

Открывайте разные форматы историй для чтения и общения. В приложении удобно читать статьи и смотреть видео, писать комментарии.

3/4

Оставайтесь в курсе событий!

Возвращайтесь к нужным статьям: добавляйте статьи в Сохранённое, чтобы прочитать их позже или сохранить в коллекции. Настройте уведомления, чтобы не пропустить самое интересное от любимых блогеров, медиа и каналов.

4/4

Читайте о своих интересах.

Алгоритмы Дзена понимают, что вам нравится, и стараются показывать только то, что будет действительно интересно. Если источник вам не подходит - его можно исключить.

1/4

Тематические ленты.

С общей ленты со всеми статьями легко переключайтесь на тематические: кино, еда, политика, знаменитости.

2/4

Разнообразные форматы.

Открывайте разные форматы историй для чтения и общения. В приложении удобно читать статьи и смотреть видео, писать комментарии.

3/4

Оставайтесь в курсе событий!

Возвращайтесь к нужным статьям: добавляйте статьи в Сохранённое, чтобы прочитать их позже или сохранить в коллекции. Настройте уведомления, чтобы не пропустить самое интересное от любимых блогеров, медиа и каналов.

4/4

Читайте о своих интересах.

Алгоритмы Дзена понимают, что вам нравится, и стараются показывать только то, что будет действительно интересно. Если источник вам не подходит - его можно исключить.

1/4

Тематические ленты.

С общей ленты со всеми статьями легко переключайтесь на тематические: кино, еда, политика, знаменитости.

2/4

Разнообразные форматы.

Открывайте разные форматы историй для чтения и общения. В приложении удобно читать статьи и смотреть видео, писать комментарии.

3/4

Оставайтесь в курсе событий!

Возвращайтесь к нужным статьям: добавляйте статьи в Сохранённое, чтобы прочитать их позже или сохранить в коллекции. Настройте уведомления, чтобы не пропустить самое интересное от любимых блогеров, медиа и каналов.

4/4

Дзен доступен во всем мире более чем на 50 языках

Смело рекомендуйте Дзен своим друзьям из других стран.

العَرَبِيَّة‎العَرَبِيَّة‎
Удобно пользоваться в смартфоне

У Дзена есть приложения для iOS и Android.

Пользуйтесь в браузере

Дзен доступен с любого устройства в вашем любимом браузере. Также Дзен встроен в Яндекс.Браузер.

Удобно пользоваться в смартфоне

У Дзена есть приложения для iOS и Android.

Пользуйтесь в браузере

Дзен доступен с любого устройства в вашем любимом браузере. Также Дзен встроен в Яндекс.Браузер.

Удобно пользоваться в смартфоне

У Дзена есть приложения для iOS и Android.

Пользуйтесь в браузере

Дзен доступен с любого устройства в вашем любимом браузере. Также Дзен встроен в Яндекс.Браузер.

© 2015–2021 ООО «Яндекс», 0+

Дизайн и разработка — Charmer

К сожалению, браузер, которым вы пользуйтесь, устарел и не позволяет корректно отображать сайт. Пожалуйста, установите любой из современных браузеров, например:

Яндекс.Браузер Google Chrome Firefox Safari

Open Hair Congress II, Венеция. Громкий дебют. / Новости / OAI Vinokurov & Friends Москва

Событие – Open Hair Congress II – проходило в Венеции, с 29 апреля по 2 мая на площадке культового отеля Excelsior, который с 1932 года собирает мировых звезд в дни проведения Венецианского кинофестиваля. Платиновым спонсором Конгресса стала компания Wella Professionals, международным информационным партнером – издательский дом Estetica. В России Академию поддержал журнал «Долорес».

 

Программа мероприятия была обширна. На торжественном ужине по случаю открытия почетный гость Вольфанго Кун, человек, внесший огромный вклад в развитие индустрии красоты, долгие годы возглавлявший представительство Wella во Франции, рассказал, что 50 лет назад по его приглашению в знаменитом отеле собрались лучшие стилисты Европы. Его сын, Манфред Кун, также долгие годы проработавший в индустрии, теперь является одним из топ-менеджеров Академии. Факт, что основатель и президент Академии Дмитрий Винокуров по совету Манфреда выбрал именно это чудесное место для проведения первого значительного события Open Academy International Vinokurov and Friends кажется ему символичным. По мнению Вольфанга, Дмитрий продолжает традицию заботы о парикмахерах, дает новые импульсы для их творчества.

 

Тема преемственности стала главной и в выступлении главы издательского дома EsteticaРоберто Писсимилья. Семья Писсимилья вот уже в третьем поколении руководит издательством. Развитие парикмахерского ремесла и искусства стало главным делом жизни этой знаменитой в профессиональных кругах семьи. Дмитрий Винокуров, по словам Роберто, служит той же великой цели. Поэтому, заверил Роберто, его сын, которому он вскоре передаст бразды правления, будет также рад поддерживать начинания Дмитрия.

 

 

Первый рабочий день Конгресса (30 апреля) представил его участникам 7 мастер-классов. Среди них «Современные мужские волосы» от Владимира Гаруса, Ирины Бахтиной («Салон Дмитрия Винокурова») и Андрея Никитенко (Top Gun), мастер-класс признанного итальянского мэтра свадебной моды Филиппо Сэпе (Filippo Sepe), модные салонные образы и вечерние прически от Академии Axen’s(Швеция), street-styleв исполнении Патрика Колбова (Patrik Kolbow) (Германия), бизнес-семинар Александра Херцберга (Alexander Herzberg), а также ток-шоу по тенденциям развития парикмахерской моды и индустрии, который провели главный редактор журнала «Долорес» Марина Новикова и директор и владелец компании «Мастер-Класс!» Елена Ковалюк (Новороссийск). 

 

1 мая стал подлинным днем Высокой парикмахерской моды. На глазах участников Конгресса члены Академии создавали новый тренд «Eco-Mania». Процесс рождения коллекции был полностью открыт для всех присутствующих: от стрижки и стайлинга, подбора одежды с комментариями стилиста об актуальных тенденциях, которые диктуют мировые Дома моды, до фотосъёмки готовых образов, постановки кадра, работы с моделями и волосами перед камерой.

Таким образом организаторы события явили миру индустрии красоты абсолютно новый, поистине революционный формат шоу.

 

 

 

 

Участниками творческого эксперимента стали:

Dmitry Vinokurov,                 Дмитрий Винокуров

Dmitry Magin,                       Дмитрий Магин

Dmitry Zhilin,                        Дмитрий Жилин

Valery Lazarev,                     Валерий Лазарев

Elena Nemtseva,                  Елена Немцева

Rustam Mirasov,                  Рустам Мирасов

Kanat Askarov,                     Канат Аскаров (Казахстан)

Dmitry Ageev,                       Дмитрий Агеев

Malgorzata Babicz               Малгожата Бабич (Польша)

Pawel Babicz                       Павел Бабич (Польша)

Irina Bakhtina,                      Ирина Бахтина

Marina Cherkasova,             Марина Черкасова

ArtyomKotenyov                  Артем Котенёв

Slava Kutin,                          Слава Кутьин

Maxim Lazarev,                    Максим Лазарев

Edward Manukian,               Эдвард Манукян

Sergey Maslov,                     Сергей Маслов

Zoran Radic,                         Зоран Радич

Tatiana Shekina,                   Татьяна Шекина

Tatiana Shuvalova,               Татьяна Шувалова

Diana Simonyan,                  Диана Симонян

Sergey Zhilinsky,                  Сергей Жилинский

Marsel Zinnurov,                  Марсель Зиннуров

 

Организаторы Конгресса благодарны спонсорам, поддержавшим мероприятие: компанию TiGi, компанию Welonda,Германо-Российский Форум, туроператора AlbaTravel.

 

 

 


Александр Рогов запускает новое мэйковер-шоу «Рогов дома», которое заменит «Рогов в городе»

16:02, 21.04.2020

Стилист будет общаться с участницами по видеосвязи.

Поделиться | Понравилось

26 апреля на канале СТС стартует новая программа «Рогов дома», которая заменит мэйковер-шоу «Рогов в городе». Известный стилист Александр Рогов продолжит преображать девушек со всей России, но теперь в режиме самоизоляции. Как освежить лицо и убрать мешки под глазами, в чём лучше ходить дома, можно ли носить длинные волосы и оставаться брюнеткой после 45 –– на эти и другие вопросы зрителей Рогов ответит им лично в формате видеосвязи.

«К сожалению, сейчас у нас нет возможности ездить по стране и преображать героинь на местах. По этой причине нам пришлось временно закрыть всеми любимый проект «Рогов в городе» и найти ему модную замену. Новый формат мне кажется актуальным, потому что часто меня спрашивают об уходе за собой в условиях самоизоляции. Мы также продемонстрируем, как можно развлечь себя дома: выкрасить джинсы или футболку, устроить модные и спортивные челленджи, сыграть в фанты и многое другое», — поделился Александр Рогов, который также выступает продюсером шоу.

Александр Рогов запускает новое мэйковер-шоу «Рогов дома», которое заменит «Рогов в городе»

В шоу «Рогов дома» модные советы желающим также дадут помощницы Александра Рогова –– визажист Елена Крыгина и стилист по волосам Елена Немцева. Не обойдётся и без звездных гостей. В каждом выпуске Александр будет готовить полезный завтрак и приглашать в прямой эфир знаменитость, чтобы хоть и на расстоянии, но составить ему компанию.

Съёмки программы проходят в квартире самого Александра Рогова. Известный стилист покажет, как делает зарядку, кормит любимого кота и даже пригласит камеру в «святая святых» –– в свою гардеробную. Зрители также смогут выбрать образ ведущего для следующего выпуска, проголосовав за понравившийся комплект в его микроблоге в Instagram. Кроме того, Александр продолжит выполнять каверзные задания от съёмочной группы проекта.

Александр Рогов

Напомним, что шоу «Рогов в городе» стартовало в сентябре 2019-го на СТС. В рамках программы Александр Рогов отправился в модное турне по восьми крупнейшим городам России: посетил Санкт-Петербург, Нижний Новгород, Ростов-на-Дону, Екатеринбург, Самару, Казань, Уфу и Сочи. В каждом у столичного звездного стилиста были только сутки, чтобы преобразить героинь, которые мечтают измениться в лучшую сторону, но не знают, как это сделать. С помощью местных специалистов Александр подобрал девушкам яркие образы и показал, что и в провинции можно найти стильные вещи и выглядеть не хуже столичных модниц.

«Новое шоу — для тех и про тех, кто думает, что за МКАДом кончается стиль. Быть классной и модной можно, независимо от места, где вы живете. Для этого есть все средства в родном городе, что я и докажу. И мне хочется не просто сделать эффектные преображения, но и открыть зрителям нашу страну с неожиданной стороны», — раскрыл идею шоу Рогов, который, к слову, выступил еще и в качестве креативного продюсера проекта.

Александр Рогов с героиней шоу «Рогов в городе»

Читайте также:

СТС запускает новое мейковер-шоу с Александром Роговым «Рогов в городе»

СТС запускает новое мейковер-шоу «Рогов. Студия 24»

«СТС Love» запускает шоу «Прирожденные шопоголики» при участии Александра Рогова

Елена Немцева, Россия, 32 года, ВКонтакте

Личная информация

Деятельность

Чудеса творю: ))

Можно редактировать: да

Обязательно к заполнению: нет

Можно скрыть настройками приватности: да


Интересы

скрыты или не указаны

Можно редактировать: да

Обязательно к заполнению: нет

Можно скрыть настройками приватности: да


Любимая музыка

скрыта или не указана

Можно редактировать: да

Обязательно к заполнению: нет

Можно скрыть настройками приватности: да


Любимые фильмы

"Реквием по мечте", "Альфа дог", "Американская история "Х" ", "Бойцовский клуб"

Можно редактировать: да

Обязательно к заполнению: нет

Можно скрыть настройками приватности: да


Любимые телешоу

скрыты или не указаны

Можно редактировать: да

Обязательно к заполнению: нет

Можно скрыть настройками приватности: да


Любимые книги

"Мастер и Маргарита" Булгаков, "Вероника решает умереть" Пауло Коэльо

Можно редактировать: да

Обязательно к заполнению: нет

Можно скрыть настройками приватности: да


Любимые игры

На нервах)))

Можно редактировать: да

Обязательно к заполнению: нет

Можно скрыть настройками приватности: да


Любимые цитаты

Не стоит относиться к жизни так серьезно-никому из нас еще не удавалось выбраться из нее живым. *** Соль жизни в том, что она не сахар. если мозги есть-это хорошо. А если их нет-об этом не задумываешься. *** Eсли вам никто не говорит, что вы красивый..вам повезло!!-вас окружают честные люди!!!!:))) *** Мнение окружающих-это мнение тех,кого не спрашивают. *** Лишь утратив всё,до конца - человек обретает свободу... ***

Можно редактировать: да

Обязательно к заполнению: нет

Можно скрыть настройками приватности: да


О себе

Я АНГЕЛ. ...)))

Можно редактировать: да

Обязательно к заполнению: нет

Можно скрыть настройками приватности: да


Елена Немцева Скамер Профиль | Список мошенничества



Женщина-мошенница Елена Немцева

Женщина-мошенница Елена Немцева


E-mail: [email protected] com

Опасность мошенничества:

85%

Детали

Имя: Елена
Расположение [Адрес]: неизвестно Клин (Россия)
Возраст: 26
Дата рождения:
Псевдонимы: Аленка, Елена, Еленка, Еленка,

Отчеты:


Письмо 1 привет моя сладкая любовь Прескотт. Безумно рада получить сейчас ваши письма. Я очень-очень прошу вас написать мне как можно скорее сегодня. Я не мог написать вам в выходные, так как меня не было дома, я проводил выходные у родителей. Моя любовь у меня с Интернетом, поскольку меня на этой неделе отключат, если До пятницы не заплачу проблему за интернет. Мне домой пришла расписка, что я должен заплатить пошлину 50 $. за последние месяц так как я не платил и мне надо платить за этот месяц столько.Вы понимаете, что мне сейчас нужно найти 100 долларов на оплату интернета, и у меня сейчас нет этих денег, вы можете помочь мне с этой небольшой суммой Деньги что мы могли бы продолжать писать друг для друга и узнавать столько же возможно до нашей встречи в будущем. Я люблю тебя, Прескотт, и я прошу бога, чтобы ты меня понял и написал мне, как это возможно в ближайшее время. Твоя любовь Елена. Письмо 2 привет моя сладкая любовь Я безумно рад, когда получаю ваши письма, я все время думаю о вас и с этим нечего делать, Мое сердце разбито твоей любовью. Я не могу поверить в то, что у меня есть нашел такого человека, который разделяет мои чувства, Я рад, что наши чувства взаимны, поэтому уверен, что ваши отношение ко мне серьезное, Мне подсказывает сердце, просто мне давно надо доверять кому из мужчины они кажутся мне обманщиками. У меня сейчас мало времени и я хочу написать ответ на ваш письмо и Прошу ответа на мое письмо от вас напишите мне сразу как я буду нажимать с нетерпением твоего ответь и как только получу тебе напишу еще.Я правда доверяю тебе и хочу приехать и разделить с тобой все любви и ласки. Я понимаю все, что вы мне пишете и хочу сказать, что хочу жить с тобой вместе как Я доверяю вам и хочу, чтобы мы были вместе и понимали друг друга. Я так же хочу рассказать вам о моем путешествии. Я пошел в наше туристическое агентство и мне сказали, что мне нужно ехать в Москва ваше посольство заказать визу и паспорт билет на борту самолета и Хочу завтра поехать в Москву что заказать документы, но раньше эти Я должен получить сегодня от вас письмо с ответом на свой вопрос. На сколько дней я могу приехать к вам? Я должен приехать в какой аэропорт, чтобы вы могли меня встретить? Я получу полную информацию о поездке в Москву, и тогда я смогу говорить ты. Я хочу приехать и любить тебя днем ​​и ночью, Я хочу, чтобы мы друг друга понимали и любили, Я хочу, чтобы мы решили нашу дальнейшую жизнь. Жду твоего письма как есть возможно в ближайшее время. Твоя любовь Елена. Письмо 3 Россия, город: Конаково, улица: Чайковского 8/11, индекс: 17125

Фотобиологическая лаборатория

Лаборатории

Основана в 1961 году

Телефон: +7 3

44 30

E-mail: [email protected]

Заведующий лабораторией: Высоцкий Евгений Степанович, канд.

Персонал лаборатории:

  • Белобров Петр Иванович, д.т.н.

  • Кудряшева Надежда Сергеевна, д.э.н.

  • Франк Людмила Александровна, д.

  • Кратасюк Валентина Александровна, д.

  • Маркова Светлана Владимировна, канд. Экон.

  • Валентин Н.Петушков, канд.

  • Есимбекова Елена Николаевна, к.э.н.

  • Маликова Наталья Петровна, канд.

  • Степанюк Галина Александровна, к.э.н.

  • Красицкая Василиса Владимировна, к.э.н.

  • Еремеева Елена Валерьевна, канд.

  • Родионова Наталья Сергеевна, канд.

  • Белогурова Надежда Валерьевна, канд.

  • Немцева Елена Валерьевна, к.э.н.

  • Людмила Петровна Буракова

  • Павел Васильевич Наташин

  • Кудрявцев Александр Николаевич

  • Ларионова Марина Дмитриевна

  • Верюгина Надежда Ивановна

Список основных публикаций

  1. Еремеева Е.В., Маркова С.В., ван Беркель В.Дж.Х., Высоцкий Е. С. Роль ключевых остатков обелина в связывании целентеразина и превращении в 2-гидроперокси-аддукт // J.Photochem. Photobiol. В, 2013, 127: 133-139.

  2. Еремеева Е.В., Маркова С.В., Франк Л.А., Виссер А.Дж., ван Беркель В.Дж., Высоцкий Е.С. Биолюминесцентные и спектральные свойства мутантов триады His-Trp-Tyr обелина и экворина // Photochem Photobiol Sci. 2013, 12 (6): 1016-24.

  3. Еремеева Е.В., Маркова С.В., Высоцкий Е.С. Высокоактивный BRET-репортер на основе мутанта желтого люциферазы Renilla muelleri // Докл. Biochem. Биофизика, 2013, 450: 147-150.

  4. Еремеева Е.В., Наташин П.В., Сонг, Л., Чжоу, Ю.Г., ван Беркель, В.Дж.Х., Лю, З.Дж., Высоцкий, Е.С. Кислородная активация комплекса апообелин-целентеразин // Chembiochem., 2013, 14: 739-745.

  5. Есимбекова Е., Кондик А., Кратасюк В. Биолюминесцентный ферментативный экспресс-анализ интегральной токсичности воды // Экологический мониторинг и оценка, 2013. 185 (7): 5909-5916.

  6. Красицкая В.В., Кудрявцев А.Н., Шимомура О., Франк Л.А. Мутанты обелина как репортеры в биолюминесцентном анализе связывания с двумя аналитами // Anal. Методы, 2013, 5: 636640.

  7. Алиева Роза Р., Белогурова Надежда Валерьевна, Петрова Алена Сергеевна, Кудряшева Надежда Сергеевна. Флуоресцентные свойства Ca2 + -независимого разряженного обелина и перспективы его применения // Anal. & Bioanal.Chem. 2013, 405 (10): 3351-3358.

  8. Селиванова М.А., Могильная О.А., Бадун Г.А., Выдрякова Г.А., Кузнецов А.М., Кудряшева Н.С. Влияние трития на светящиеся морские бактерии и ферментативные реакции // Journal of Environmental Radioactivity, 2013, 130: 19-25.

  9. Еремеева Е.В., Высоцкий Е.С., Вестфаль, А.Х., ван Мирло, К.П.М., ван Беркель, W.J.H. Связывание лигандов и конформационные состояния фотобелка обелина // FEBS Lett., 2012, 586: 41734179.

  10. Камнев А.А., Тугарова А.В., Селиванова М.А., Тарантилис П. А., Полисью М.Г., Кудряшева Н.С. Влияние америция-241 и гуминовых веществ на Photobacterium phosphoreum: биолюминесценция и диффузное отражение FTIR-спектроскопические исследования // Спектрохим.Acta A: Мол. Biomol. Спектроскопия, 2012, 586 (23): 4173-4179.

  11. Кудрявцев А. Н., Красицкая В. В., Петунин А. И., Бураков А. Ю., Франк Л. А. Одновременный биолюминесцентный иммуноферментный анализ сывороточного общего и IgG-связанного пролактина // Анал. Chem. 2012, 84: 3119-3124.

  12. Маркова С.В., Буракова Л.П., Гольц С., Маликова Н.П., Франк Л.А., Высоцкий Е.С. Светочувствительный фотобелок беровин из биолюминесцентного гребневика Beroe abyssicola: новый тип Са2 + -регулируемого фотопротеина // FEBS J., 2012, 279 (5): 856-870.

  13. Маркова С.В., Буракова Л.П., Высоцкий Е.С. Высокоактивная усеченная люцифераза копеподы Metridia longa // Биохимия. Биофиз. Res. Commun., 2012, 417 (1): 98-103.

  14. Тарасова А.С., Кислан С.Л., Федорова Е. С., Кузнецов А.М., Могильная О.А., Стом Д.И., Кудряшева Н.С. Биолюминесценция как инструмент изучения процессов детоксикации в растворах солей металлов с участием гуминовых веществ // Журнал фотохимии и фотобиологии, 2012, 117 (5): 164170.

  15. Александрова М., Рожко Т., Выдрякова Г., Кудряшева Н. Влияние америция-241 на светящиеся бактерии. Роль пероксидов // Journal of Environmental Radioactivity, 2011, 102: 407-411.

  16. Кириллова Н.Н., Герасимова М.А., Немцева Е.В., Кудряшева Н.С. Влияние галогенированных флуоресцентных соединений на биолюминесцентную реакцию // Anal. & Bioanal.Chem. 2011, 400 (2): 343-51.

  17. Красицкая В. В., Корнеева С. И., Кудрявцев А.Н., Маркова С. В., Степанюк Г. А., Франк Л. А. Ca2 + -зависимый коэлентеразин-связывающий белок из Renilla как фермент-зависимая метка для анализа связывания // Anal. Биоанал. Chem., 2011, 401: 25732579.

  18. Кратасюк В., Есимбекова Э., Коррелл М., Баклин Р. Биолюминесцентный ферментный тест для индикации стресса растений в закрытых системах жизнеобеспечения // Люминесценция. 2011 г.

  19. Маликова Н.П., Виссер Н.В., ван Хук А., Скакун В.В., Высоцкий Е.С., Ли Дж., Виссер А.Дж.Зелено-флуоресцентный белок биолюминесцентной медузы Clytia gregaria является облигатным димером и не образует стабильного комплекса с Ca (2 +) - разряженным фотобелком клитином // Биохимия, 2011, 50 (20): 4232-41.

  20. Рожко Т.В., Бондарева Л.Г., Могильная О.А., Выдрякова Г.А., Болсуновский А.Я., Стом Д.И., Кудряшева Н.С. Детоксикация растворов AM-241 гуминовыми веществами: биолюминесцентный мониторинг // Anal. & Bioanal.Chem., 2011, 400 (2): 329334.

  21. Тарасова А.Стом С.И., Кыдряшева Н.С. Мониторинг биолюминесцентной токсичности растворов окислителей: действие гуминовых веществ // Экологическая токсикология и химия, 2011, 30 (5): 1013-7.

  22. Белогурова Н., Кудряшева Н. Разряженный фотобелин обелин: особенности спектров флуоресценции // Журн. Фотохим. Photobiol. Б., 2010, 101: 103-8.

  23. Белогурова Н. , Кудряшева Н. Разряженный фотобелин обелин: особенности флуоресценции // Журн. Фотохим. Photobiol.Б., 2010, 101: 103108.

  24. Еремеева Е. В., Франк Л. А., Маркова С. В., Высоцкий Е. Ca2 + -регулируемый фотобелин обелин как N-концевой партнер в слитых белках // Журнал ЮФУ. Биология, 2010, 4: 372-383.

  25. Франк Л. А., Ca2 + -регулируемые фотопротеины: эффективные репортеры иммуноанализа // Сенсоры, 2010, 10: 11287-11300.

  26. Кратасюк В., Есимбекова Е., Коррелл М., Баклин Р. Биолюминесцентный ферментный анализ для индикации стресса растений в закрытых системах жизнеобеспечения // Люминесценция, 2010.

  27. Маркова С. В., Буракова Л. П., Франк Л. А., Гольц С., Коростилева К. А., Высоцкий Е. С. Зелено-флуоресцентный белок биолюминесцентной медузы Clytia gregaria Клонирование кДНК, экспрессия и характеристика нового рекомбинантного белка // Фотохим. Photobiol. Наук, 2010, 9: 757765.

  28. Белогурова Н.В., Кудряшева Н. С., Алиева Р.Р. Активность верхних электронно-возбужденных состояний в биолюминесценции кишечнополостных. // Журнал молекулярной структуры, 2009, 924926: 148152.

  29. Ветрова Елена В., Кудряшева Надежда С., Ченг Кван Х. Влияние хинона на динамику затухания флуоресценции эндогенного флавина, связанного с бактериальной люциферазой // Биофизика. Chem, 2009, 141 (1): 59-65.

Группа поддержки Урал Грейт лично (Страница 1)








Елена Гомза

Руководитель группы


Елена Волчек


Наталья Лощилова


Мария Белостоцкая


Наталья Хлопцева


Екатерина Сивирина


Елена Немцева


Светлана Честикова


Татьяна Бурылова


Юлия Жбанова

E-mail и телефон Елены Немцевой

Мы установили стандарт поиска писем

Нам доверяют более 7. 2 миллиона пользователей и 95% из S&P 500.


Нам не с чего начать. Обыскивать Интернет круглосуточно - это не поможет. RocketReach дал нам отличное место для старта. Теперь у нашего рабочего процесса есть четкое направление - у нас есть процесс, который начинается с RocketReach и заканчивается огромными списками контактов для нашей команды продаж..it, вероятно, сэкономит Feedtrail около 3 месяцев работы в плане сбора лидов. Мы можем отвлечь наше внимание на поиски клиента прямо сейчас!

Отлично подходит для создания списка потенциальных клиентов. Мне понравилась возможность определять личные электронные письма практически от любого человека в сети с помощью RocketReach. Недавно мне поручили проект, который рассматривал обязанности по связям с общественностью, партнерству и разъяснительной работе, и RocketReach не только связал меня с потенциальными людьми, но и позволил мне оптимизировать мой поисковый подход на основе местоположения, набора навыков и ключевого слова.

- Брайан Рэй , Менеджер по продажам @ Google

До RocketReach мы обращались к людям через профессиональные сетевые сайты, такие как Linkedln. Но нам было неприятно ждать, пока люди примут наши запросы на подключение (если они вообще их примут), а отправка обходится слишком дорого ... это было серьезным ударом скорости в нашем рабочем процессе и источником нескончаемого разочарования. Благодаря огромному количеству контактов, которые мы смогли найти с помощью RocketReach, платформа, вероятно, сэкономила нам почти пять лет ожидания.

Это лучшая и самая эффективная поисковая система по электронной почте, которую я когда-либо использовал, и я пробовал несколько.Как по объему поисков, так и по количеству найденных точных писем, я считаю, что он превосходит другие. Еще мне нравится макет, он приятный на вид, более привлекательный и эффективный. Суть в том, что это был эффективный инструмент в моей работе, как некоммерческой организации, обращающейся к руководству.

До RocketReach процесс поиска адресов электронной почты состоял из поиска в Интернете, опроса общих друзей или преследования в LinkedIn. Больше всего меня расстраивало то, как много времени все это занимало. Впервые я использовал RocketReach, когда понял, что принял правильное решение. Поиск писем для контактов превратился в одноразовый процесс, а не на неделю.

Поиск электронных писем для целевого охвата был вручную и занимал очень много времени. Когда я попробовал RocketReach и нашел бизнес-информацию о ключевых людях за считанные секунды с помощью простого и непрерывного процесса, меня зацепило! Инструмент сократил время на установление связи с новыми потенциальными клиентами почти на 90%.

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

  • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
  • Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
  • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
  • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
  • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или уточнить у системного администратора.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


Что сохраняется в файлах cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Структурные различия быстрых и медленных бактериальных люцифераз, выявленные филогенетическим анализом | Биоинформатика

Аннотация

Мотивация: Бактериальные люциферазы - это гетеродимерные ферменты, которые катализируют химическую реакцию, так называемую биолюминесценцию, которая вызывает излучение света у бактерий. Биолюминесценция широко используется в качестве репортерной системы в исследовательских инструментах и ​​коммерческих разработках. Однако детали механизмов, которые стабилизируют и трансформируют промежуточные продукты реакции, а также различия в ферментативной кинетике между различными бактериальными люциферазами еще предстоит выяснить.

Результаты: проанализировано выравниваний аминокислотных последовательностей для 21 бактериальной люциферазы (как α-, так и β-субъединицы). Для α-субъединицы, содержащей активный центр фермента, идентифицировано 48 позиций полиморфных аминокислот. По их словам, последовательности разделились на две отдельные группы, известные как медленные и быстрые, в зависимости от скорости затухания реакции биолюминесценции. Проанализированы различия в активном центре фермента, вызванные структурным полиморфизмом.

Доступность и реализация: Трехмерные модели люциферазы Photobacterium leiognathi и люциферазы Vibrio harveyi (с реконструированной подвижной петлей) свободно доступны в базе данных PMDB: PM0080525 и PM0080526, соответственно.

Контактное лицо: [email protected]

Дополнительная информация: Дополнительные данные доступны на сайте Bioinformatics онлайн.

1 Введение

Светящиеся бактерии известны как наиболее распространенные и распространенные биолюминесцентные организмы. Их традиционная классификация основана на морфологических особенностях, метаболизме и экологическом распределении светоизлучающих видов. В настоящее время, согласно анализу последовательностей генов 16S рРНК и gyrB , все известные светящиеся бактерии отнесены к трем семействам Gammaproteobacteria : Vibrionaceae , Shewanellaceae и Enterobacteriaceae (Dunzykap and Urban 2013).Несмотря на ряд исследований, многие детали механизма бактериальной биолюминесценции, включая различия в кинетике реакций, еще предстоит узнать.

Хотя исследования идентифицировали последовательность приблизительно 21 бактериальной люциферазы, но смогли решить только кристаллическую структуру люциферазы из Vibrio harveyi (Campbell et al. , 2009). Бактериальная люцифераза состоит из α- и β-субъединиц, свернутых в один и тот же тип (β / α) 8 или цилиндрической структуры TIM и кодируемых генами luxA и luxB .В дополнение к сходству структур α- и β-субъединицы имеют примерно 32% идентичности последовательностей, что указывает на то, что ген luxB мог развиться в результате дупликации гена luxA (Baldwin et al. , 1979). Однако α-субъединица больше из-за дополнительных 29 аминокислотных остатков, которые составляют мобильную петлю, фланкирующую активный сайт фермента и играющую важную роль в связывании с субстратами (Campbell and Baldwin, 2009).

Все известные бактериальные люциферазы катализируют одну и ту же окислительную реакцию (рис.1), где R-CHO и R-COOH представляют собой длинноцепочечный алифатический альдегид и соответствующую карбоновую кислоту, FMNH 2 и FMN - восстановленный и окисленный мононуклеотид флавина соответственно. Взаимодействие люциферазы с субстратами вызывает образование электронно-возбужденных частиц и последующее излучение света. Излучаемый свет затем медленно затухает кинетическим образом первого порядка (рис. 1B и C). Максимальная интенсивность света реакции пропорциональна количеству фермента, а распад зависит от константы скорости фермента и длины альдегидной цепи.Интенсивность света и кинетика затухания различаются у люцифераз разных видов. Однако два типа люцифераз, медленные и быстрые, можно различить по характеру распада (время оборота фермента) (рис. 1) (Nealson and Hastings, 1979). Люциферазы из видов Photobacterium являются ферментами с быстрым распадом (скорость находится в пределах 0,64–1,0 с - 1 ), а люциферазы из Vibrio и Photorhabdus - медленные (0,12 с - ) (Nealson, Hastings, 1979; Tinikul, Chaiyen, 2014).Причины кинетических различий связаны со связыванием с субстратами (Tinikul and Chaiyen, 2014), продолжительностью времени, которое требуется для образования промежуточных продуктов в реакции (Abu-Soud et al. , 1993), и распадом скорость промежуточного соединения гидропероксифлавина при стабилизации средой связывающего кармана (Lin et al. , 2002). Пока изучены лишь несколько люцифераз из ограниченного круга видов бактерий. Однако анализ новых светящихся бактериальных геномов может помочь лучше понять бактериальную биолюминесценцию.

Рис. 1.

Схема химической реакции, катализируемой бактериальной люциферазой ( A ), и типичная кинетика светового излучения для люцифераз быстрого ( B ) и медленного ( C ) распада

Рис. 1.

Схема химической реакции, катализируемой бактериальной люциферазой ( A ), и типичная кинетика светового излучения для люцифераз быстрого ( B ) и медленного ( C ) распада

Текущее исследование было направлено на выявление консервативных мотивов, которые участвуют в образование активного центра бактериальных люцифераз.Мы проанализировали филогенетическое родство аминокислотных последовательностей люциферазы 21 светящейся бактерии. Наши данные показали, что две клады люцифераз, родственных бактериям, имеют сходную кинетику реакций. Мы также идентифицировали остатки, которые важны для формирования бактериальных групп, и обсудили структурные различия между активными ферментативными центрами, а также механизмы стабилизации промежуточных продуктов флавина между двумя группами.

2 Материалы и методы

Изучены аминокислотные последовательности люцифераз 21 светящейся бактерии: A. fischeri ES114, A. logei KCh2 и A. salmonicida NCMB 2262 из рода Aliivibrio ; Candidatus Photodesmus katoptron Akat1; P. aquimaris NBRC 104633, P. damselae BT-6, P. kishitanii NCMB 844, P. leiognathi lnuch.13.1, P.l. subsp. mandapamensis ATCC 27561, P. phosphoreum MIE из рода Photobacterium ; Ph. asymbiotica и Ph. luminescens ATCC 29999 из рода Photorhabdus ; S. hanedai NCIMB 2157 и S. woodyi ATCC 51908 из рода Shewanella ; V. albensis VL 426, V. azureus NBRC 104587, V. campbellii ATCC BAA-1116, V. chagasveyii SB-52, V. NBRC 15634, В. orientalis ATCC 33934 и V. vulnificus ATCC 43382 из рода Vibro . Мы провели филогенетический анализ аминокислотных последовательностей α- и β-субъединиц с использованием программного пакета Jalview (версия 2.8.1, (Waterhouse et al. , 2009)). Набор данных был проанализирован с помощью программного обеспечения множественного выравнивания последовательностей MAFFT (Katoh and Standley, 2013) и BLOSUM 62 в качестве матрицы замещения, штрафа за открытие промежутка 1,53 и штрафа за удлинение промежутка 0.123 были использованы. ProtTest (Abascal et al. , 2005) позволил идентифицировать LG + G как наиболее подходящую модель замены аминокислот для эволюции обеих субъединиц. Эта модель была использована для построения филогенетических деревьев с помощью программного обеспечения PhyML (Guindon et al. , 2010). Чтобы найти корни реконструированных деревьев, мы добавили внешнюю группу. Более того, пакет ape (версия 3.1-4, (Paradis et al. , 2004)) позволил нам выполнить другой анализ в среде с открытым исходным кодом R / Bio-проводник (Gentleman et al., 2004).

Чтобы построить третичную структуру других бактериальных люцифераз, используя сервер Swiss-MODEL (Biasini et al. , 2014), мы применили кристаллическую структуру люциферазы V. harveyi (PDB ID: 3FGC ) в качестве шаблона. Затем мы оптимизировали полученные структуры для 1 нс при 300 К и постоянном давлении 1 атм, используя модель явного силового поля воды SPC / E и CHARMM27 в GROMACS (версия 5.0.3, (Pronk et al. , 2013) )).Мы также проанализировали ферментативные активные центры с помощью VMD (Humphrey et al. , 1996). Третичные структуры для других медленных люцифераз вблизи активного центра не изменились по сравнению с таковой у люциферазы V. harveyi . Ферменты из быстрой группы также продемонстрировали очень похожую архитектуру связывающего кармана, но отличающуюся от кармана V. harveyi .

3 Результаты и обсуждение

3.1 Консервативные регионы

Анализ аминокислотной последовательности показал, что парная идентичность последовательностей среди 21 вида составляет 53–99% для α-субъединицы и 43–98% для β-субъединицы (дополнительная таблица S1). Этот результат хорошо согласуется с ранее сообщенными уровнями идентичности аминокислот, которые были получены для 6 видов из рода Photobacterium , Photorhabdus и Vibrio (Meighen, 1991). Было обнаружено, что α-субъединицы имеют высококонсервативные аминокислотные последовательности со 138 идентичными положениями.Восемь из них: αGlu 43 , αHis 44 , αHis 45 , αArg 107 , αTyr 110 , αAsp 113 , αArg 125 , αGlu 175 , известные как катализаторы. активность фермента (Hou et al. , 2014; Huang and Tu, 1997; Madvar and Naderi-Manesh, 2007; Moore et al. , 1999; Xin et al. , 1991). Согласно кристаллической структуре люциферазы V. harveyi , активный центр (полость в пределах 6 Å от сайта связывания FMN) состоит из 35 аминокислотных остатков, 20 из которых являются консервативными.Такой консервативный сбор аминокислот позволяет сформировать правильную структуру субстрат-связывающего кармана.

Другая значительная часть консервативных остатков α-субъединицы была обнаружена на α / β-интерфейсе: 25 идентичных аминокислот можно наблюдать на расстоянии 4 Å от поверхности β-субъединицы. Более трети консервативных областей β-субъединицы также контактируют с α-субъединицей (25 положений). Это подтверждает предполагаемую важную функцию β-субъединицы - стабилизацию активной конформации α-субъединицы (Campbell et al., 2009).

3,2 Две группы люцифераз

Филогенетический анализ аминокислотных последовательностей α-субъединицы выявил две клады люцифераз с идентичностью 65,01 и 53,99% в каждой группе (рис. 2). Эти группы в значительной степени соответствуют предыдущей классификации люцифераз как медленных или быстрых в зависимости от их кинетических свойств. Филогенетический анализ последовательностей α-субъединиц люциферазы помог предсказать тип фермента с неизвестной кинетикой. Судя по дереву, люцифераза из Candidatus Photodesmus katoptron , вероятно, относится к медленному типу, как и остальные люциферазы из видов Vibrio , а люциферазы Aliivibrio и Shewanella относятся к быстрому типу.

Рис. 2.

Филогенетическое дерево аминокислотных последовательностей α-субъединицы бактериальных люцифераз. Бактерии в каждой кладе имеют сходную кинетику реакции. Жирным шрифтом выделены названия бактерий с экспериментально подтвержденной кинетикой фермента.

Рис. 2.

Филогенетическое дерево аминокислотных последовательностей α-субъединицы бактериальных люцифераз. Бактерии в каждой кладе имеют сходную кинетику реакции. Жирным шрифтом выделены названия бактерий с экспериментально подтвержденной кинетикой ферментов.

Точные и частичные совпадения, обнаруженные в определенных положениях исследуемых последовательностей, характеризуют две наблюдаемые клады (дополнительная таблица S2).Точное совпадение относится к остатку, который строго сохраняется в группе. Например, все быстрые люциферазы содержат Leu, в то время как все медленные люциферазы без исключения имеют Ala в положении 183 (αLeu 183 по сравнению с αAla 183 ). Частичное совпадение относится к менее чем четырем остаткам одного и того же типа (в соответствии с полярностью, типом группы боковой цепи и т. Д.) В одном положении, показывающим тенденцию к образованию одной и той же клады. Например, все быстрые люциферазы имеют Arg в отличие от Asn медленных люцифераз в положении 26, за исключением Ph. asymbiotica и Ph. люминесценция с αLys 26 .

Мы идентифицировали 22 точных совпадения по α-субъединице, которые являются неотъемлемой чертой найденных клад. Окрестности активного центра (область в пределах 6 Å от молекулы FMN, связанной с активным центром и рядом с ним) содержит 11 из 22 точных совпадений. Четыре из них (αAla 74 , αAla 75 , αCys 106 , αVal 173 ранее были описаны как критически важные для правильного функционирования медленного В. harveyi люцифераза (Fisher et al. , 1995; Hou et al. , 2014; Lin et al. , 2004)).

В дополнение к 22 точным совпадениям остатков, характерным для двух групп последовательностей α-субъединиц, было обнаружено 26 частичных совпадений остатков. Два из них были экспериментально идентифицированы как важные остатки для функционирования люциферазы: αSer 227 (Chen and Baldwin, 1989) и αLys 286 (Campbell and Baldwin, 2009). Последний расположен на подвижной петле фермента и стабилизирует промежуточные продукты реакции.αSer 227 важен для формирования третичной структуры фермента. Изучая кристаллическую структуру, мы наблюдали, что остатки, соответствующие частичным совпадениям остатков, распределяются по структуре, в отличие от остатков, идентифицированных как точные совпадения. Наблюдаемая тенденция может указывать на то, что остатки с частичными совпадениями необходимы для сохранения третичной структуры.

В ряде предыдущих исследований была предпринята попытка преобразовать медленную люциферазу в быстрый тип путем изменения последовательности сегмента (остатки 166–233) рядом с активным центром на матричную последовательность из быстрой люциферазы (Valkova et al., 1999) или сайт-направленный мутагенез остатка αGlu 175 (Hosseinkhani et al. , 2005). Валкова и др. зарегистрировал изменения кинетических свойств люциферазы, но одновременно наблюдал существенную потерю активности фермента (до 0,03% активности дикого типа). Согласно нашим выводам, замещенная часть (67 а.о.) состоит из 24 консервативных остатков, 6 аминокислот, которые соответствуют точным совпадениям (т. Е. Должны определять медленный или быстрый тип кинетики) и 3 остатка, которые описаны здесь как частичные совпадения.Однако остальные замещенные остатки (34 а.о.) отличаются от фермента дикого типа. Это различие могло вызвать искажение третичной структуры и снижение ферментативной активности. Что касается αGlu 175 , мы обнаружили, что он сохраняется среди всех изученных светящихся бактерий; следовательно, этот остаток вряд ли отвечает за тип кинетики. Мутация αGlu 175 индуцировала более высокую гибкость структуры и дестабилизировала промежуточные продукты реакции. Эти изменения усилили темные пути реакции и, наконец, увеличили кинетику фермента.Примечательно, что естественные быстрые люциферазы очень активны, а некоторые из них даже более активны, чем медленные (Кацев и др. , 2004).

Предполагается, что β-субъединица бактериальной люциферазы стабилизирует активную конформацию α-субъединицы посредством водородных связей и ряда специфических гидрофобных взаимодействий. Эксперименты выявили важную роль взаимодействия между αPhe 272 и βTyr 151 для активности люциферазы V. harveyi (Campbell et al., 2009). Мы обнаружили, что αPhe 272 соответствует точному совпадению остатков: αTyr во всех быстрых люциферазах по сравнению с αPhe в медленных. Интересно, что β-субъединицы также претерпевают замены βTyr-βPhe, что, вероятно, указывает на аналогичный механизм стабилизации, сохраняющийся среди всех светящихся видов бактерий, включая взаимодействие ароматического стэкинга между боковыми цепями аминокислот.

Филогенетическое дерево для β-субъединицы демонстрирует различные клады для медленной и быстрой люциферазы, а также для α-субъединицы (дополнительный рисунок S1).Однако только 7 точных и 19 частичных совпадений были идентифицированы посредством анализа выравнивания последовательностей β-субъединиц (дополнительная таблица S3).

Механизмы происхождения быстрых и медленных люцифераз от единственного предка еще недостаточно изучены. Некоторое соответствие типа кинетики можно было найти только с экологическими нишами. Виды, имеющие медленные люциферазы, в основном свободноживущие, в то время как люциферазы с быстрым распадом типичны для симбиотических светящихся бактерий (Dunlap and Urbanczyk, 2013). Однако было показано, что филогении светящихся бактерий и их организмов-хозяев не обнаруживают значимого топологического соответствия (Dunlap et al., 2007). Чтобы обратиться к функциональной эволюции бактериальных люцифераз, необходимо провести исследование изменений в клонах с реконструкцией согласованного дерева (Arenas and Posada, 2010).

3.3 Анализ активных центров люцифераз

Тот факт, что многие точные совпадения α-субъединиц расположены в активном центре или близко к нему, позволяет исследовать все различия, которые могут проявляться в структуре этой части фермента. Мы реконструировали 3D-структуру для P. leiognathi люцифераза как представитель быстрой группы и произведена оптимизация структуры с помощью молекулярной динамики. Картирование активных центров выявило сохранение бочкообразной структуры ТИМ как для быстрых, так и для медленных люцифераз. Кроме того, структура связывающего кармана менялась из-за различий в аминокислотном составе. Кроме того, мы выявили два значительных различия в структуре активного центра для медленных и быстрых ферментов, вызванные четырьмя точными заменами аминокислот.

Мы наблюдали смещение фенилаланина (αPhe 6 ↔ αIle 6 , αLeu 8 ↔ αPhe 8 ) (рис. 3A). αPhe 6 V. harveyi медленная люцифераза) и αPhe 8 (в смоделированной быстрой люциферазе P. leiognathi быстрой люциферазы) обнаружены на си-лицевой стороне изоаллоксазиновой части. В обоих случаях они образуют активный сайт, необходимый для связывания белок-лиганд, который включает гидрофобные и стэкинг-взаимодействия.Замена на гидрофобные остатки, такие как лейцин и изолейцин, также очень распространена и сохраняет гидрофобные поверхности в активном центре.

Рис. 3.

Особенности, выявленные в активных центрах медленных и быстрых люцифераз, вызванные двумя парами точных совпадений остатков: ( A ) сдвиг фенилаланина (αPhe 6 ↔α Ile 6 , αLue 8 ↔ α Phe 8 ) и ( B ) использование альтернативной серосодержащей аминокислоты (αAla 74 ↔α Met 74 , αCys 106 ↔α Val 106 )

Рис.3.

Особенности, выявленные в активных центрах медленных и быстрых люцифераз, вызванные двумя парами точных совпадений остатков: ( A ) сдвиг фенилаланина (αPhe 6 ↔α Ile 6 , αLue 8 ↔α Phe 8 ) и ( B ) использование альтернативной серосодержащей аминокислоты (αAla 74 ↔α Met 74 , αCys 106 ↔α Val 106 )

Кроме того, мы изучили использование альтернативной серосодержащие аминокислоты (αAla 74 ↔ αMet 74 , αCys 106 ↔ αVal 106 ), стабилизирующие производные флавинов (рис. 3Б). Биолюминесцентная реакция включает стадию, на которой добавление молекулы O 2 и депротонирование N 1 приводит к образованию гидропероксифлавина в комплексе с ферментом (Hou et al. , 2014). Abu-Soud et al. показали, что в этой стадии реакции участвует αCys · 106 , поскольку его мутация на αVal · 106 приводит к чрезвычайно нестабильному комплексу люциферазы с промежуточным гидропероксифлавином и снижает активность биолюминесценции (Abu-Soud et al., 1993). Однако двойная мутантная люцифераза с αGly 75 и αVal 106 вместо αAla 75 и αCys 106 показала высокую ферментативную активность и стабильное промежуточное, но быстрое затухание люминесценции (Lin et al. , 2002). . Это хорошо согласуется с нашими выводами, что αAla 75 и αCys 106 относятся к точным совпадениям в медленной группе, тогда как αGly 75 и αVal 106 относятся к точным совпадениям в быстрой группе. Изучая смоделированные активные центры быстрых люцифераз на предмет серосодержащих остатков, которые могут выполнять ту же функцию, что и αCys 106 , мы обнаружили остаток αMet 74 . Это одна из высококонсервативных аминокислот в группе быстрых люцифераз (точное совпадение). Таким образом, мы можем сделать вывод, что αMet 74 играет роль замены αCys 106 в быстрых люциферазах, которые также способны образовывать водородную связь через свою серную группу. Вероятно, что αMet 74 взаимодействует с атомом N 5 , а αCys 106 , вероятно, контактирует с атомом N 1 (рис.3Б). Следовательно, αMet 74 , αGly 75 и αVal 106 , вероятно, образуют важную часть активного центра, который стабилизирует промежуточные соединения в быстрых люциферазах, подобных αAla 74 , αAla 75 и αCys 106 в медленных. ед.

Насколько нам известно, существование двух эволюционно консервативных связывающих платформ не может быть связано со всеми вариациями метаболизма и регуляции световой системы. Предполагается, что важную физиологическую роль реакции люминесценции играет вторичная дыхательная цепь, которая активна, когда уровни кислорода или железа слишком низкие для работы цитохромной системы (Dunlap and Urbanczyk, 2013).Это позволяет клеткам продолжать расти даже в микроаэробных условиях, например, в кишечнике животных. Ранее была получена некоторая корреляция между типом кинетики и чувствительностью штаммов бактерий к перекиси водорода (Кацев и др. , 2004). Но причинно-следственную связь в этих наблюдениях и связь с полиморфными формами люциферазы следует понимать на основе общей картины эволюции и метаболизма светящихся бактерий. Наличие двух связывающих платформ, вероятно, играет важную роль, исходя из всей картины филогении и метаболизма светящихся бактерий.

4 Заключение

Изучение консервативных мотивов, критических для взаимодействия бактериальной люциферазы с субстратами и стабилизацией промежуточных продуктов, далеко идёт с точки зрения понимания механизма биолюминесценции. В этом исследовании мы представили филогенетический анализ аминокислот, важных для светоизлучающей реакции. Наши данные свидетельствуют о консервативных позициях в структуре всех известных бактериальных люцифераз и аминокислот, обуславливающих разделение этого фермента на быстрые и медленные.Мы обнаружили два набора критических аминокислот, точно соответствующих каждому типу люцифераз и, вероятно, отвечающих за скорость кинетического распада. Посредством моделирования гомологии структуры белков мы наблюдали образование двух разных связывающих платформ, которые, вероятно, стабилизируют промежуточные продукты реакции. Два эволюционно фиксированных типа кинетики реакции могут указывать на появление двух различных функций, выполняемых бактериальными люциферазами, которые никогда ранее не обсуждались со структурной точки зрения.

Благодарности

Мы хотели бы поблагодарить доктора Аболгасема Тохидпура за комментарий к рукописи.

Финансирование

Данное исследование частично финансировалось РФФИ в соответствии с исследовательским проектом № 16-34-00746 мол_а; Министерством образования и науки Российской Федерации [проект № 1762] и за счет государственного бюджета, выделенного на фундаментальные исследования в Российской академии наук [проект № 01201351504].

Конфликт интересов : не объявлен.

Список литературы

и другие. . (

2005

)

Prottest: выбор наиболее подходящих моделей эволюции белка

.

Биоинформатика

,

21

,

2104

-

2105

.

и другие. . (

1993

)

Кинетическая дестабилизация промежуточного гидропероксифлавина посредством сайт-направленной модификации реактивного тиола в бактериальной люциферазе

.

J. Biol. Chem

.,

268

,

7699

-

7706

.

(

2010

)

Вычислительный дизайн централизованных генов hiv-1

.

Curr. HIV Res

.,

8

,

613

-

621

.

и другие. . (

1979

)

Ковалентная структура субъединиц бактериальной люциферазы: Nh3-концевая последовательность демонстрирует гомологию субъединиц

.

Proc. Natl. Акад. Sci

.,

76

,

4887

-

4889

.

и другие. . (

2014

)

Швейцарская модель: моделирование третичной и четвертичной структуры белка с использованием информации об эволюции

.

Nucleic Acids Res

.,

gku340

.

(

2009

)

Два остатка лизина в мобильной петле бактериальной люциферазы стабилизируют промежуточные продукты реакции

.

J. Biol. Chem

.,

284

,

32827

-

32834

.

и другие. . (

2009

)

Кристаллическая структура бактериального комплекса люцифераза / флавин дает представление о функции субъединицы

β.

Биохимия

,

48

,

6085

-

6094

.

(

1989

)

Случайный и сайт-направленный мутагенез бактериальной люциферазы: исследование сайта связывания альдегида

.

Биохимия

,

28

,

2684

-

2689

.

(

2013

) Светящиеся бактерии. В: (ред.).

Прокариоты

,

4-е изд. Springer

,

Нью-Йорк, Нью-Йорк

.

и другие. . (

2007

)

Филогенетический анализ специфичности и кодивергенции симбионтов-хозяев в биолюминесцентных симбиозах

.

Кладистика

,

23

,

507

-

532

.

и другие. . (

1995

)

Трехмерная структура бактериальной люциферазы из Vibrio harveyi на 2,4. англ. резолюция

.

Биохимия

,

34

,

6581

-

6586

.

и другие. . (

2004

)

Bioconductor: разработка открытого программного обеспечения для вычислительной биологии и биоинформатики

.

Genome Biol

.,

5

,

R80

.

и другие. . (

2010

)

Новые алгоритмы и методы оценки филогении максимального правдоподобия: оценка производительности phyml 3.0

.

Syst. Биол

.,

59

,

307

-

321

.

и другие. . (

2005

)

Случайный мутагенез бактериальной люциферазы: критическая роль glu175 в контроле затухания люминесценции

.

Biochem. J

.,

385

,

575

-

580

.

и другие. . (

2014

)

Понимание бактериальной биолюминесценции: теоретическое исследование всего процесса, от восстановления флавина до светового излучения

.

Chem. Евро. J

.,

20

,

7979

-

7986

.

(

1997

)

Идентификация и характеристика каталитического основания в бактериальной люциферазе с помощью химического восстановления темного мутанта

.

Биохимия

,

36

,

14609

-

14615

.

и другие. . (

1996

)

VMD - визуальная молекулярная динамика

.

J. Mol. График

.,

14

,

33

-

38

.

(

2013

)

Программное обеспечение для множественного выравнивания последовательностей Mafft, версия 7: улучшения производительности и удобства использования

.

Mol. Биол. Evol

.,

30

,

772

-

780

.

и другие. . (

2004

)

Влияние перекиси водорода на излучение света различными штаммами морских люминесцентных бактерий

.

J. Basic Microbiol

.,

44 ​​

,

178

-

184

.

и другие. . (

2002

)

Влияние реактивного тиола и проксимальной непролиновой цис-пептидной связи в структуре и функции люциферазы Vibrio harveyi

.

Биохимия

,

41

,

9938

-

9945

.

и другие. . (

2004

)

Изменения кинетики и спектра излучения при мутации платформы связывания хромофора в люциферазе Vibrio harveyi

.

Биохимия

,

43

,

3183

-

3194

.

(

2007

)

Критическая роль glu175 в стабильности и сворачивании бактериальной люциферазы: исследование флуоресценции при остановленном потоке

.

J. Biochem. Мол. Биол

.,

40

,

453

-

458

.

(

1991

)

Молекулярная биология бактериальной биолюминесценции

.

Microbiol. Ред.

.,

55

,

123

-

142

.

и другие. . (

1999

)

Взаимосвязь между консервативной α субъединицей аргинина 107 и эффектами фосфата на активность и стабильность люциферазы Vibrio harveyi

.

Arch. Biochem. Биофиз

.,

370

,

45

-

50

.

(

1979

)

Биолюминесценция бактерий: контроль и экологическое значение

.

Microbiol. Ред.

.,

43

,

496.

и другие. . (

2004

)

Ape: анализ филогенетики и эволюции на языке r

.

Биоинформатика

,

20

,

289

-

290

.

и другие. . (

2013

)

Gromacs 4.5: высокопроизводительный и высокопараллельный набор инструментов молекулярного моделирования с открытым исходным кодом

.

Биоинформатика

,

29

,

845

-

854

.

(

2014

) Структура, механизм и мутации бактериальной люциферазы.В: (ред.).

Биолюминесценция: основы и приложения в биотехнологии

, том 3.

Springer International Publishing

, стр.

47

-

74

.

и другие. . (

1999

)

Контроль затухания люминесценции и связывания флавина концевыми карбоксильными участками luxa в химерных бактериальных люциферазах

.

Биохимия

,

38

,

13820

-

13828

.

и другие. . (

2009

)

Jalview версия 2 редактор множественного выравнивания последовательностей и инструмент анализа

.

Биоинформатика

,

25

,

1189

-

1191

.

и другие. . (

1991

)

Функциональные последствия сайт-направленной мутации консервативных гистидильных остатков бактериальной люциферазы.альфа. субъединица

.

Биохимия

,

30

,

11255

-

11262

.

Заметки автора

© Автор, 2016.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *