Анна исаева новосибирск: Модель Anna Isaeva — Новосибирск

9:30: Регистрация и чай и кофе Research Network Design
13:15: Закрыть, затем ОБЕД

Самособирающиеся частицы, сочетающие белок RBD SARS-CoV-2 и ДНК-вакцину RBD, вызывают синергетическое усиление гуморального ответа у мышей

.

дои: 10.3390/ijms23042188.

Мария Б Боргоякова ¹ , Лариса И Карпенко ¹ , Андрей П Рудометов ¹ , Екатерина А Волосникова ¹ , Юлия А Меркулева ¹ , Екатерина В Старостина ¹ , Алексей М Задорожный ¹ , Анастасия А Исаева ¹ , Несмеянова Валентина С ¹ , Даниил В Шаньшин ¹ , Константин О Баранов ²

Принадлежности

• ¹ Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», 630559 Кольцово, Новосибирская область, Россия.
• ² Институт молекулярной и клеточной биологии СО РАН, 630090 Новосибирск, Россия.

• PMID: 35216301
• PMCID: PMC8876144
• DOI: 10.3390/ijms23042188

Бесплатная статья ЧВК

Мария Б. Боргоякова и соавт. Int J Mol Sci. 2022 .

Бесплатная статья ЧВК

дои: 10. 3390/ijms23042188.

Авторы

Мария Б Боргоякова ¹ , Лариса И Карпенко ¹ , Андрей П Рудометов ¹ , Екатерина А Волосникова ¹ , Юлия А Меркулева ¹ , Екатерина В Старостина ¹ , Алексей М Задорожный ¹ , Анастасия А Исаева ¹ , Несмеянова Валентина С ¹ , Даниил В Шаньшин ¹ , Константин О Баранов

Принадлежности

• ¹ Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», 630559 Кольцово, Новосибирская область, Россия.
• ² Институт молекулярной и клеточной биологии СО РАН, 630090 Новосибирск, Россия.

• PMID: 35216301
• PMCID: PMC8876144
• DOI: 10.3390/ijms23042188

Абстрактный

Несмотря на то, что ряд вакцин против COVID-19 уже создан и используется для массовой вакцинации, разработка эффективных, безопасных, технологичных и доступных вакцин продолжается. Мы разработали вакцину, сочетающую рекомбинантный белок и ДНК-вакцину в самособирающейся частице. Рецептор-связывающий домен (RBD) шиповидного белка SARS-CoV-2 был конъюгирован с полиглюкином:спермидином и смешан с ДНК-вакциной (pVAXrbd), что привело к образованию частиц комбинированной коронавирусной вакцины (CCV-RBD), которая содержат ДНК-вакцину внутри и белок RBD на поверхности. Частицы CCV-RBD были охарактеризованы с помощью гель-фильтрации, электронной микроскопии и интерферометрии биослоев. Для исследования иммуногенности комбинированной вакцины и ее компонентов мышей иммунизировали ДНК-вакциной pVAXrbd или белком RBD, а также частицами CCV-RBD. Самая высокая антиген-специфическая IgG и нейтрализующая активность были индуцированы CCV-RBD, а уровень антител, индуцированных только ДНК или RBD, был значительно ниже. Клеточный иммунный ответ был обнаружен только в случае вакцинации ДНК или CCV-RBD. Эти результаты демонстрируют, что комбинация ДНК-вакцины и белка RBD в одной конструкции синергетически увеличивает гуморальный ответ на белок RBD у мышей.

Ключевые слова: ДНК-вакцина; белок RBD; SARS-CoV-2; клеточный ответ; гуморальный ответ; самоорганизующиеся частицы; вируснейтрализующая активность.

Заявление о конфликте интересов

w3.org/1999/xlink» xmlns:mml=»http://www.w3.org/1998/Math/MathML» xmlns:p1=»http://pubmed.gov/pub-one»> Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Цифры

Рисунок 1

Проверка выражения RBD…

Рисунок 1

Проверка экспрессии RBD в трансфицированных клетках. ( A1 ) Ячейки HEK293T…

Проверка экспрессии RBD в трансфицированных клетках. ( A1 ) Клетки HEK293T трансфицировали pVAXrbd или pVAX (отрицательный контроль). Экспрессию гена-мишени подтверждали обнаружением соответствующей мРНК с помощью ОТ-ПЦР. Электрофоретический анализ продуктов ОТ-ПЦР в 1% агарозном геле: дорожки 1 и 3 представляют собой продукты, полученные из тотальной РНК HEK29. клетки 3Т, трансфицированные pVAX и pVAXrbd соответственно; дорожка 2 представляет собой продукт, полученный с помощью ПЦР плазмиды pVAXrbd. ( A2 ) Анализ продукции белка RBD с помощью вестерн-блоттинга в клетках HEK293T: дорожки 1 и 2 представляют собой лизаты HEK293T, трансфицированные pVAXrbd и pVAX, соответственно; дорожки 3 и 4 представляют собой культуральную среду из клеток HEK293T, трансфицированных pVAX и pVAXrbd, соответственно; дорожка 5 представляет собой очищенный рекомбинантный RBD. ( B ) SDS-PAGE анализ очищенного рекомбинантного RBD, полученного в клетках CHO-K1, трансфицированных pVEALrbd.

Рисунок 2

Общая схема комплексообразования ДНК/белка…

Рисунок 2

Общая схема комплексообразования ДНК/белок и характеристика их компонентов. ( А1 )…

Общая схема комплексообразования ДНК/белок и характеристика их компонентов. ( A1 ) Схематическое изображение сборки частиц pVAXrbd-PGS (контроль). ( A2 ) Электронная микрофотография частиц pVAXrbd-PGS. ( B1 ) Схематическое изображение сборки частиц комбинированной вакцины CCV-RBD. ( B2 ) Электронная микрофотография частиц CCV-RBD. ( C ) Подтверждение инкапсуляции ДНК в оболочку PGS и PGS-RBD с помощью электрофореза в 1% агарозном геле: 1, CCV-RBD; 2, pVAXrbd-PGS; и 3, голая плазмида pVAXrbd. ( D ) УФ-спектры структур CCV-RBD и pVAXrbd-PGS и их компонентов. 1, ПГС; 2, РБД; 3, ПГС-РБД; 4 — плазмида pVAXrbd; 5 и 6, частицы CCV-RBD и pVAXrbd-PGS соответственно. ( E ) Гель-фильтрация на колонке Sepharose CL-6B (хроматографический профиль). Синяя линия, CCV-RBD; зеленая линия, pVAXrbd-PGS; красная линия, плазмида pVAXrbd. ( F1 ) Связывание октета RBD с iB14, nAb SARS-CoV-2. ( F2 ) Связывание октета CCV-RBD с iB14, nAb SARS-CoV-2. ( G1 ) Схематическое представление взаимодействия белка RBD и антитела. ( G2 ) Схематическое изображение взаимодействия частиц CCV-RBD и антител.

Рисунок 3

Гуморальный иммунный ответ при BALB/c…

Рисунок 3

Гуморальный иммунный ответ у мышей BALB/c. ( A ) Мышей иммунизировали внутримышечно…

Гуморальный иммунный ответ у мышей BALB/c. ( A ) Мышей иммунизировали внутримышечно CCV-RBD, pVAXrbd-PGS или белком RBD дважды в дни 0 и 21, а образцы сыворотки собирали через 10 дней после второй иммунизации (31 день). ( B ) Титры специфических антител IgG к RBD SARS-CoV-2 ( 1 ) и SARS-CoV-2 S ( 2 ) определяли с помощью ИФА. ( C ) Вируснейтрализующую активность сывороток мышей, иммунизированных CCV-RBD, pVAXrbd-PGS и белком RBD, определяли с использованием штамма SARS-CoV-2 nCoV/Victoria/1/2020 (100 TCID ₅₀ ). На панелях ( В , С ) данные представлены как медиана, обратная титрам. Значимость рассчитывали с использованием непараметрического метода Манна-Уитни (* p < 0,01, ** p < 0,05).

Рисунок 4

Клеточный иммунный ответ при BALB/c…

Рисунок 4

Клеточный иммунный ответ у мышей BALB/c. ( А ) Количество спленоцитов…

Клеточный иммунный ответ у мышей BALB/c. ( A ) Количество спленоцитов, высвобождающих IFN-γ в ответ на специфическую стимуляцию пептидами из белка RBD, подсчитывали с помощью ELISpot. ( B ) Процент специфичных для SARS-CoV-2 IFN-γ-продуцирующих CD4+ ( 2 ) и CD8+ ( 3 ) Т-клеток был проанализирован с помощью ISC и проточной цитометрии ( 1 ). Статистический анализ проводили с использованием программного обеспечения GraphPad Prism 6.0. Достоверность различий между выборками определяли с помощью непараметрического метода Манна–Уитни (* p < 0,01).

См. это изображение и информацию об авторских правах в PMC

Похожие статьи

• Сравнительная иммуномодулирующая оценка рецептор-связывающего домена шиповидного белка SARS-CoV-2; потенциальный кандидат в вакцины, вызывающий сильный гуморальный и Th2-тип иммунного ответа в мышиной модели.

  Шривастава Т., Сингх Б., Ризви З.А., Верма Р., Госвами С., Вишвакарма П., Джакхар К., Сонар С., Мани С., Бхаттачарья С., Авастхи А., Сурджит М. Шривастава Т. и др. Фронт Иммунол. 2021 24 мая; 12:641447. doi: 10.3389/fimmu.2021.641447. Электронная коллекция 2021. Фронт Иммунол. 2021. PMID: 34108961 Бесплатная статья ЧВК.

• Сконструированный рецептор-связывающий домен улучшает иммуногенность поливалентных вакцин против SARS-CoV-2.

  Го И, Хе В, Моу Х, Чжан Л, Чанг Дж, Пэн С, Оджа А, Тавора Р, Парселлс М.С., Луо Г, Ли В, Чжун Г, Чхве Х, Фарзан М, Куинлан Б.Д. Гуо Ю и др. мБио. 2021 11 мая; 12 (3): e00930-21. doi: 10.1128/mBio.00930-21. мБио. 2021. PMID: 33975938 Бесплатная статья ЧВК.

• Новая ДНК-вакцина против SARS-CoV-2, кодирующая химерный белок его рецептор-связывающего домена (RBD), слитый с амино-концевой областью preS1 вируса гепатита В с мутацией W4P.

  Чон Х., Чхве Ю.М., Сео Х., Ким Б.Дж. Чон Х. и др. Фронт Иммунол. 2021 26 фев; 12:637654. doi: 10.3389/fimmu.2021.637654. Электронная коллекция 2021. Фронт Иммунол. 2021. PMID: 33732258 Бесплатная статья ЧВК.

• Быстрая разработка вакцин-кандидатов на основе самособирающихся наночастиц домена связывания рецептора белка SARS-CoV-2.

  Кан Ю.Ф., Сунь С., Чжуан З., Юань Р.Ю., Чжэн К., Ли Д.П., Чжоу П.П., Чен К.С., Лю З., Чжан С., Ю. Х., Конг С.В., Чжу Ц.И., Чжун К., Сюй М., Чжун Н.С., Zeng YX, Feng GK, Ke C, Zhao JC, Zeng MS. Кан Ю.Ф. и соавт. АКС Нано. 2021 23 февраля; 15 (2): 2738-2752. дои: 10.1021/acsnano.0c08379. Epub 2021 19 января. АКС Нано. 2021. PMID: 33464829 Бесплатная статья ЧВК.

• Растительно-продуцируемые гликозилированные и дегликозилированные in vivo белки рецептор-связывающего домена SARS-CoV-2 вызывают мощные нейтрализующие ответы у мышей.

  Мамедов Т., Юксель Д., Ильгин М., Гурбузаслан И., Гулек Б., Етискин Х., Уйгут М.А., Ислам Павел С.Т., Оздарендели А., Мамедова Г., Сай Д., Гасанова Г. Мамедов Т. и др. Вирусы. 2021 авг 12;13(8):1595. doi: 10.3390/v13081595. Вирусы. 2021. PMID: 34452461 Бесплатная статья ЧВК.

Посмотреть все похожие статьи

Цитируется

• Молекулярные механизмы патогенеза, профилактики и терапии COVID-19: подведение итогов 2021 года.

  Гусев Э. Гусев Э. Int J Mol Sci. 2022 17 ноября; 23(22):14210. дои: 10.3390/ijms232214210. Int J Mol Sci. 2022. PMID: 36430684 Бесплатная статья ЧВК.

• Природные IgG против S-белка и RBD SARS-CoV-2 не связывают и не гидролизуют ДНК и не являются аутоиммунными.

  Тимофеева А.М., Седых С.Е., Ермаков Е.А., Матвеев А.Л., Одегова Е.И., Седых Т.А., Щербаков Д.Н., Меркулева И.А., Волосникова Е.А., Несмеянова В.С., Тикунова Н.В., Невинский Г.А. Тимофеева AM и соавт. Int J Mol Sci. 2022 8 ноября; 23 (22): 13681. дои: 10.3390/ijms232213681. Int J Mol Sci. 2022. PMID: 36430159 Бесплатная статья ЧВК.

• Оптимизация условий электропорации in vivo и доставка ДНК-вакцины, кодирующей RBD SARS-CoV-2, с использованием определенного протокола.

  Кисаков Д.Н., Кисакова Л.А., Боргоякова М.Б., Старостина Е.В., Таранов О.С., Ивлева Е.К., Пьянков О.В., Зайковская А.В., Щербаков Д.Н., Рудометов А.П., Рудометова Н.Б., Волкова Н.В., Гуреев В.Н., Ильичев А.А., Карпенко Л.И. Кисаков Д.Н. и соавт. Фармацевтика. 2022 Октябрь 22;14(11):2259. doi: 10.3390/фармацевтика14112259. Фармацевтика. 2022. PMID: 36365078 Бесплатная статья ЧВК.

• Краткосрочное влияние индукции домен-специфического антитела, связывающего рецептор спайкового белка SARS-CoV-2, на нейтрофил-опосредованный иммунный ответ у мышей.

  Болховитина Е.Л., Вавилова Ю.Д., Богородский А.О., Загрядская Ю.А., Охрименко И.С., Сапожников А.М., Борщевский В.И., Шевченко М.А. Болховитина Е.Л. и соавт. Int J Mol Sci. 2022 26 июля; 23 (15): 8234. дои: 10.3390/ijms23158234. Int J Mol Sci. 2022. PMID: 35897803 Бесплатная статья ЧВК.

• Являются ли хомяки подходящей моделью для оценки иммуногенности субъединичных вакцин против COVID-19 на основе RBD?

  Меркулева И.А., Щербаков Д.Н., Боргоякова М.Б., Исаева А. А., Несмеянова В.С., Волкова Н.В., Арипов В.С., Шаншин Д.В., Карпенко Л.И., Беленькая С.В., Казачинская Е.И., Волосникова Е.А., Есина Т.И., Сергеев А.А., Титова К.А., Коняхина Ю.В., Зайковская А.В., Пьянков О.В., Колосова Е.А., Викторина О.Е., Шелемба А.А., Рудометов А.П., Ильичев А.А. Меркулева И.А., и соавт. Вирусы. 2022 16 мая; 14 (5): 1060. дои: 10.3390/v14051060. Вирусы. 2022. PMID: 35632800 Бесплатная статья ЧВК.

Просмотреть все статьи «Цитируется по»

Рекомендации

1. 1. Моренс Д.М., Таубенбергер Дж.К., Фаучи А.С. Универсальные вакцины против коронавируса — острая необходимость. Н. англ. Дж. Мед. 2022; 386: 297–299. дои: 10.1056/NEJMp2118468. — DOI — пабмед
2. 1. Полак Ф. П., Томас С.Дж., Китчин Н., Абсалон Дж., Гуртман А., Локхарт С., Перес Дж.Л., Перес Марк Г., Морейра Э.Д., Зербини С. и др. Безопасность и эффективность мРНК-вакцины BNT162b2 против COVID-19. Н. англ. Дж. Мед. 2020;383:2603–2615. дои: 10.1056/NEJMoa2034577. — DOI — ЧВК — пабмед
3. 1. Баден Л.Р., Эль Сахли Х.М., Эссинк Б., Котлофф К., Фрей С., Новак Р., Димерт Д., Спектор С.А., Руфаэль Н., Крич С.Б. и др. Эффективность и безопасность вакцины мРНК-1273 SARS-CoV-2. Н. англ. Дж. Мед. 2021; 384: 403–416. дои: 10.1056/NEJMoa2035389. — DOI — ЧВК — пабмед
4. 1. Ся С., Чжан Ю., Ван Ю., Ван Х., Ян Ю., Гао Г.Ф., Тан В., Ву Г., Сюй М., Лу З. и др. Безопасность и иммуногенность инактивированной вакцины против SARS-CoV-2, BBIBP-CorV: рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование фазы 1/2. Ланцет Инфекция. Дис. 2021; 21:39–51. doi: 10.1016/S1473-3099(20)30831-8. — DOI — ЧВК — пабмед
5. 1. Фолегатти П.

      Добавить комментарий Отменить ответ

      Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

      Комментарий *

      Имя *

      Email *

      Сайт